Elementos que debe tener un vector de transformación de cloroplastos:.

Transformación genética de cloroplastos

1. Elementos que debe poseer un vector de transformación de cloroplastos

Elementos que debe tener un vector de transformación de cloroplastos:

-regiones de recombinación izquierda y derecha: regiones con identidad nucleotídica a secuencias del genoma plastídico para promover la integración del gen de interés por recombinación homóloga;

- promotor: promotor de expresión plastídica

- selector: gen que confiere resistencia a antibióticos, herbicidas, etc.

- sitio de unión a ribosoma (ribosome binding site) requerido para iniciar la traducción

- terminador: terminador de la transcripción de cloroplastos

2. Ventajas y desventajas de transformación genética de cloroplastos

Ventajas:

Se consigue niveles de expresión y rendimiento altos, debido al grado de ploidía del plastoma.

Transferencia de más de un gen y por tanto de más de un rasgo en un solo evento de transformación, gracias a la expresión de operones policistrónicos.

Mayor estabilidad del fenotipo transgénico, dado que no se ha reportado silenciamiento génico que varié la expresión del transgén.

En el plastidio se pueden acumular ciertos tipos de compuestos que pueden ser perjudiciales si ocurren en el citoplasma.

La mayoría de las especies de interés agronómico, los cloroplastos se heredan únicamente del parental materno, por lo que se evita la transmisión de genes mediante polen.

Desventajas

La principal limitante de la transformación de cloroplastos es conseguir la homoplasmia, la sustitución de los plastomas silvestres por los plastomas transgénicos en todos los plastidios de las células.

Además este tipo de transformación está limitada a las pocas especies para las que existen procedimientos eficientes de obtención de protoplastos.

La transformación de protoplastos requiere de técnicas demandante y requiere de habilidades y conocimientos amplios sobre cultivo celular, por lo que la optimización de este tipo de técnicas se encuentra en progreso.

3. Diferenciar transgénica homoplásmica de una no homoplásmica

Para identificar las plantas homoplásmicas (es decir, plantas en las cuales todos los plastidios de todas las células estén transformados) portadoras del gen de interés, el vector de transformación incluye un gen marcador de resistencia a un antibiótico junto con el gen que se quiere transferir al genoma de la planta. Se favorece la proliferación de los genomas transformados al colocarlos en un medio selectivo que, generalmente, incluye un antibiótico. Los sectores transformados se diferencian de los no transformados por que permanecerán de color verde mientras que estos últimos adquirirán un color blanquecino (por no ser resistentes al antibiótico del medio).

Referencias

Benítez, A. (2005).

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