Espectrofotometría de para-nitrofenol

Espectrofotometría de para-nitrofenol
Milagros Cervantes Mariano, María Torres Chamorro
Estudiantes de programa de Biología, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad del Atlántico Km 7 Antigua Vía Puerto
torreschamorrofec@gmail.com

Resumen: La espectrofotometría es una técnica usada para determinar la concentración de un compuesto en una solución. En este practica se usará el espectrofotómetro para determinar el largo de onda que se registrara en la mayor lectura de absorbancia, que en nuestro caso fue de 1.032. También con ese mismo dato se hará el coeficiente de extinción molar del rojo-fenol. El reactivo que se usó en la práctica fue el Rojo-Fenol, ya que el para-nitrofenol, no se encontraba disponible.

Introducción

La espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizados para la detección especifica de moléculas. La espectrofotometría es la medida cuantitativa de la interacción de la radiación ultravioleta (UV), visible e infrarroja con un material. La naturaleza de esta interacción dependerá de las propiedades físicas del material que se estudiara, por ejemplo, si es trasparente u opaco, liso o áspero, puro o contaminado. Por lo tanto, la espectrofotometría también se puede utilizar para cuantificar, a su vez estas propiedades físicas. Como ya se sabe la luz puede ser reflejada, trasmitida, dispersada o absorbida, y un material puede emitir luz, ya sea porque ha absorbido algo de luz y la reemite, porque ha ganado energía de alguna manera o porque emite luz. Las opciones de mediciones espectrofotométricas incluyen reflectancia espectral, trasmitancia, absorbancia, emisión, dispersión y fluorescencia, y pueden clasificarse como propiedades ópticas fenomenológicas del material. Las mediciones espectrofotométricas también se pueden usar para probar la naturaleza intrínseca o interna del material, como su índice de refracción y el coeficiente de extinción [1]. Para garantizar la relación que existe entre la absorbancia y la concentración, es de manera directa. Se deberá preparar una curva estándar, a pesar de su nombre, la curva estándar que da la relación proporcional es una línea recta. Para preparar la curva estándar, se necesitarán hacer una serie de diluciones de una solución estándar, el primero tubo solo contendrá la muestra a evaluar, y se llamará blanco, esto se usa para calibrar el espectrofotómetro en cuanto a la absorbancia, los demás tubos contendrán concentraciones crecientes del sustrato a evaluar. Estos valores se leerán usando el espectrofotómetro [2].
El espectrofotómetro es el instrumento que se usa para medir la absorción  de la luz con respecto a las longitudes de onda  específicas, ya sean visibles o no, y nos permitirá determinar la concentración .

Metodología

Parte I

• Se preparó una solución de Rojo fenol con agua destilada, en una proporción que fue de 750µl cada una. Se llevó al espectrofotómetro, teniendo en cuenta un blanco que fue la misma solución de agua destilada. Se blanqueó el espectrofotómetro en el blanco que se eligió anterior.
• Se tomó lecturas de absorbancia desde los 260nm a 605nm, en un intervalo de absorbancia de 15nm, blanqueando cada vez que se hizo la lectura.
• Se determinó dónde está el pico más alto.

Parte II

• Se preparó con anterioridad una dilución en serie del rojo fenol, en cuatro tubos eppendorff se le adiciono 750 µl de agua destilada y al primero se le adiciono 750µl de rojo fenol, se hizo una resuspension. Al cual se le extrajo otros 750µl y se le adiciono al otro tubo hasta completar la dilución seriada.
• Blanquear el espectrofotómetro al mayor largo de onda que fue encontrado en la parte I, y se tomó lecturas de los tubos 2,3 y 4, ya que el primer tubo se utilizó para determinar el pico más alto y la absorbancia más alta. Se tenía que blanquear antes de cada lectura, eso quiere decir, que antes de pasar a tomar la lectura del otro tubo se tenía que hacer el blanqueamiento.

Resultados y Discusión

Resultados

Parte I

    [pic 2]

relación entre la absorción de energía y el medio absorbente. De acuerdo con la ley de Bouger (o de Lambert), cada capa del medio absorbe una fracción igual de la energía que lo atraviesa. Según la ley de Beer, la capacidad de absorción de una sustancia disuelta es directamente proporcional a su concentración en una solución.

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