Espectrofotometría

1 MARCO TEÓRICO

La espectrofotometría comprende una serie de técnicas analíticas usadas para análisis cualitativo y cuantitativo.

Una radiación electromagnética se puede describir como un flujo de partículas llamadas fotones, o bien como una onda propagándose en el espacio. De esta última descripción se toma el concepto de longitud de onda, definiéndolo como la distancia entre dos máximos consecutivos de la onda.

Esta es inversamente proporcional a la energía de la misma, de tal manera que el espectro de radiaciones electromagnéticas abarca un amplio rango de energías, las de menor energía son las ondas de radio y las de mayor energía son las llamadas radiación gamma.

Las moléculas tienen un estado energético que se puede alterar por la absorción de radiación electromagnética a determinada longitud de onda, lo que se puede medir para realizar un estudio cuali o cuantitativo.

Las principales ventajas de la espectrofotometría son:

• Sensibilidad relativa elevada.

• Facilidad para realizar mediciones rápidas.

• Grado de especificidad relativamente elevado.

Azul de metileno

El azul de metileno es un colorante ampliamente utilizado en la tinción de estructuras celulares. Este compuesto es de color azul oscuro y muy soluble en agua. Para su determinación espectrofotométrica en UV-vis se realiza a 660 nm. Se emplea para la preparación de disolución colorante elaborado según formula de Loeffler para tinción de bacterias alcohol – ácido resistente como bacilos de Tuberculosis o la lepra por el método Ziehl Neelsen. En este método esta solución es considerada como colorante de contraste, por lo que tiñe de color azul los tejidos de soporte y otras estructuras orgánicas de los bacilos.

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