Esta experiencia de laboratorio tiene como objetivo reconocer el material de laboratorio, la preparación de este y su debida esterilización, también como aprender sobre los medios de cultivos, las técnicas de siembra e inoculación de microorganismos,

Laboratorio de Microbiología

Sebastián Meneses Alcayaga

E-mail: smenesesalyaga@gmail.com

Universidad Santo Tomas sede La Serena, Chile

RESUMEN

      Esta experiencia de laboratorio tiene como objetivo reconocer el material de laboratorio, la preparación de este y su debida esterilización, también como aprender sobre los medios de cultivos, las técnicas de siembra e inoculación de microorganismos, su enriquecimiento y como aislarlos.

Palabras claves: esterilización, medio de cultivo, inoculación, microorganismos.

INTRODUCCION

La microbiología es el estudio de los microorganismos, seres vivos pequeños que no sean visibles a simple vista. Están presentes en todas las superficies exteriores de los utensilios, en el aire, en el agua, en los alimentos y en las cavidades internas del cuerpo que tienen conexión con el exterior (tracto respiratorio y tracto digestivo). Los microorganismos no se encuentran aislados, sino que su número suele ser muy elevado por unidad de volumen o por unidad de superficie, por consiguiente, son muy abundantes, Además suelen formar agrupaciones de varios microorganismos que interaccionan entre sí: unos pueden usar como alimento los productos residuales de otros, o pueden ser atacados por los vecinos que compiten por el mismo alimento. Estas interacciones dan lugar a sucesiones de microorganismos: la microflora de una superficie, de un alimento o del interior de una cavidad abierta del cuerpo puede variar con el tiempo.

MATERIALES Y REACTIVOS

• Alcohol 70% v/v.
• Agua destilada.
• Papel absorvente.
• Matraces erlenmeyer.
• Balanza analítica.
• Placa de petri.
• Agua estancada.
• Asa de loop.
• Mechero bunsen.
• Incubadora.
• Estufa.
• Autoclave.
• Tubos de ensayo.
• Agitador vórtex.
• Tapones de algodón.
• Glucosa, peptona y extracto de levadura.
• Agar
• Agar McConkey.

PROCEDIMIENTO

Limpieza de área de trabajo:

• Esparcir el alcohol 70%v/v por el mesón y con papel ir secando.

Esterilización de material:

• Introducir agua en la autoclave, luego introducir las muestras y encender.

Medio de cultivo Saccharomyces c., siembra e inoculación:

• Calcular gramos de glucosa, peptona y extracto de levadura que se utilizará en 230mL para luego disolverlos en dicho volumen.
• Adicionar 20mL en dos tubos de ensayo, 10mL y 10mL, 140mL en un matraz.
• Por separado pesar los gramos calculados de agar y disolverlos en 50mL, hervir para luego adicionarlos a la capsula Petri, esterilizar con el autoclave y almacenar.
• Luego de un tiempo de espera, se debe tomar una pequeña porción de una cepa que creció en el agar no esterilizado y traspasarlo al matraz y al tubo mediante técnica aséptica por distintos tipos de siembra con la ayuda de un asa de loop.

Enriquecimiento y aislamiento de microorganismos.

• Para el enriquecimiento de un microorganismo en específico se debe crear el medio de cultivo selectivo hecho de agar McConkey. Calcular los gramos de agar y disolverlos en 50mL, hervir para luego adicionarlos a la capsula Petri, esterilizar con el autoclave y almacenar.
• Luego tomar un inoculo de agua estancada con la ayuda de un asa de loop y aplicando la técnica aséptica traspasarlo a la placa petri mediante el método de siembra por estrías por agotamiento.

RESULTADOS

Con el uso del alcohol al 70% se logra disminuir la carga bacteriana de la zona del trabajo y con el uso del autoclave se logró la eliminación total de los microorganismos en el material, dejándolo listo para trabajar.

Para el Medio de cultivo Saccharomyces c. compuesto de 7g/L de glucosa, 3,5g/L e peptona y 1,5g/L e extracto de levadura.

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