Evalucación De Antioxidantes De Polifenoles De Algas Marinas
Enviado por gaboz88 • 21 de Agosto de 2011 • 3.015 Palabras (13 Páginas) • 1.112 Visitas
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE POLIFENOLES DE
ALGAS MARINAS
EVALUATION OF ANTIOXIDANT ACTIVITY OF POLYPHENOLIC
COMPOUNDS FROM MARINE ALGAE
Argimiro Rivero Rosales
Facultad de Ciencias del Mar (Universidad de Las Palmas de Gran Canaria). Edificio Ciencias
Básicas. Campus de Tafira s/n. 35017 Las Palmas de Gran Canaria (España)
arivero@dqui.ulpgc.es
Juana Rosa Betancort Rodríguez
Instituto Tecnológico de Canarias. Playa de Pozo Izquierdo s/n. 35119 Santa Lucía. (España)
RESUMEN
La formación de radicales libres mediante procesos naturales conduce a la oxidación de
biomoléculas, dando lugar a diversas enfermedades. Los organismos fotosintéticos están
expuestos a ambientes muy oxidativos, por lo que poseen un sistema antioxidante muy eficaz.
Presentamos en este trabajo un sencillo método para la extracción y evaluación de la actividad
antioxidante de los polifenoles de algas marinas. La concentración de polifenoles se determina
siguiendo el método de Folin-Ciocalteu, y la medición de la actividad antioxidante se realiza por
el método del DPPH.
INTRODUCCIÓN
La excesiva oxidación de biomoléculas da lugar a diversos daños en el organismo (1). Así, un
exceso de radicales libres se ha relacionado con una mayor incidencia de diversas
enfermedades degenerativas (1) como cáncer, enfermedades cardiacas, inflamación, artritis,
disfunción cerebral, aceleración del envejecimiento (2), etc.
El mecanismo por el que los radicales libres producen sus efectos transcurre mediante una
reacción radicalaria, en la que se forman especias reactivas oxigenadas, que son los que
producen los efectos nocivos. Este proceso se ve favorecido por la presencia de oxígeno y de luz
ultravioleta, que inicia la formación de radicales libres.
La utilización de antirradicales permite que no se produzcan las especies reactivas oxigenadas
(por esto, también se les suele llamar antioxidantes), de forma que se impiden las consecuencias
de su actividad (3,4). Estos antirradicales actúan principalmente en reacciones de terminación de
cadenas de radicales libres. Impidiendo la oxidación de lípidos y otras moléculas cediendo
átomos de hidrógeno de forma que se neutralizan los radicales libres.
La naturaleza ofrece una gran oportunidad para el descubrimiento de nuevos compuestos
naturales con diversas actividades (5), especialmente en aquellas zonas con una gran flora
autóctona (6). Las plantas y algas marinas están sometidas a una intensa radiación ultravioleta y
una alta concentración de oxígeno en su entorno. Pero los efectos nocivos de los radicales libres
producidos en estas condiciones, son neutralizados por antioxidantes naturales (7).
En esta práctica se pretende estudiar la actividad antioxidante de algas marinas, ya que es bien
conocido que las algas pardas (Phaeophyta) poseen altas concentraciones de compuestos
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antioxidantes (8,9,10) formados por polímeros de unidades de floroglucinol (1,3,5-
trihidroxibenceno) y denominados polifenoles.
OBJETIVOS
En esta práctica se extraerán polifenoles de algas marinas y se valorará su concentración y
actividad antioxidante mediante tres pasos
• Extracción de polifenoles
• Determinación de la concentración de polifenoles en los extractos
• Determinación de la capacidad reductora de los extractos
MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS
Algas marinas pardas (frescas o desecadas)
Espectrofotómetro UV-visible y cubetas de cuarzo
Nevera
Balanza
Agitador
Material básico: Matraces aforados de 10 mL
Erlenmeyer 250 mL
Probeta 100 mL
Pipetas de 0.05, 0.5 y 10 mL
Filtración a vacío
Disolventes: Agua destilada
Metanol
Reactivos: Ácido acético glacial
Na2CO3 20 %
Floroglucinol [CAS nº: 108-73-6]
Reactivo Folin- Ciocalteu [MDL nº: MF CD00132625]
Polivinilpolipirrolidona (PVPP) [CAS nº: 25249-54-1]
2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) [CAS nº: 1898-66-4]
MÉTODO
I) Extracción de polifenoles de algas pardas:
Se pesan 3-4 g de algas pardas secas (o 40–50 g de alga fresca recién recolectada) y se trocean
en pequeños trozos. Se añaden 100 mL de agua/metanol (1:1), se homogeniza y se agita
durante 24 h en nevera. Posteriormente, se filtra a vacío, recogiendo el extracto final, del que
debe medirse el volumen obtenido.
II) Determinación de la concentración de polifenoles en el extracto algal
El procedimiento a seguir consiste en el método Folin-Ciocalteu (11), donde la concentración de
polifenoles se detecta mediante formación de sales de tungsteno y molibdeno, cuantificable en
espectrofotometría a 760 nm. Para evitar posibles interferencias, se tratará parte de la muestra
con polivinilpolipirrolidona (PVPP) insoluble, que se une específicamente a los polifenoles en
medio ácido. De esta forma, la diferencia de absorbancias entre el extracto tratado y no tratado
con PVPP refleja la concentración de polifenoles.
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II.a) Recta de calibrado de floroglucionol
Se prepara una disolución de floroglucinol (1mg/mL) en agua/metanol (1:1). A partir de esta
disolución, se preparan cinco disoluciones (concentraciones 0.05, 0.1, 0.2, 0.4 y 0.6 mg/mL) que
junto con una muestra control de disolvente, se someten a la reacción de Folin-Ciocalteu de la
siguiente forma: se toma 1 mL de cada disolución, se mezcla con 0.5 mL del reactivo Folin-
Ciocalteu y 1.5 mL de Na2CO3 al 20 %, enrasando con el disolvente hasta 10 mL. Estas nuevas
disoluciones se mantendrán en oscuridad durante una hora para que se produzca la reacción. Se
mide la absorbancia de cada muestra en el espectrofotómetro a longitud de onda de 760 nm.
Una vez tratados los datos de absorbancia, se obtiene la recta [Floroglucinol] = (a × Abs760) + b
II.b) Determinación de la concentración de polifenoles en el extracto algal
Se toman 30 mL del extracto y se llevan a pH 3.5–4.0 con ácido acético glacial. La disolución
resultante se separa en dos partes A y B. La Fracción A se guarda en oscuridad y se reserva. A
la fracción
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