FACULTAD DE CIENCIAS - DEPARTAMENTO DE NUTRICIÓN Y BIOQUÍMICA- BIOQUÍMICA BÁSICA

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FACULTAD DE CIENCIAS - DEPARTAMENTO DE NUTRICIÓN Y  BIOQUÍMICA

BIOQUÍMICA BÁSICA

PRÁCTICA DE LABORATORIO #10

IDENTIFICACIÓN Y SEPARACIÓN DE LÍPIDOS

DAVID ANDRÉS MOLINA DÍAZ

 MARCELA PALACIOS

 MANUELA VILLA

 LAURA MALPICA

16 DE MAYO DEL 2016

• Introducción:

• Objetivos:

- Separar e identificar lípidos mediante la cromatografía en capa delgada

- Conocer el fundamento de las pruebas de acidez de ácidos grasos

• Metodología:

Durante la práctica de laboratorio se realizaron dos pruebas experimentales con el fin de separar e identificar los lípidos en diferentes sustancias:

1. Cromatografía en capa delgada:

Inicialmente    se preparó una muestra a base de yema de huevo cocida, 5mL de una solución extractora (etanol-éter-cloroformo)  y tras macerar con suavidad esta mezcla se adicionó una vez más 5 mL de la  solución extractora.  Posteriormente la mezcla fue filtrada, y   el filtrado fue recogido en un Erlenmeyer de 100mL.

Previamente fueron activadas las cromatoplacas de silica  gel a 100°C durante 20 minutos, las cuales al enfriarse fueron marcadas en los puntos en los que se  colocarían las muestras y los patrones.  En cada uno de los puntos se aplicó con ayuda de un capilar entre 3 y 6 gotas de cada muestra patrón (Muestra de yema de huevo, colesterol, ácido oleico, ácido esteárico, aceite de oliva y aceite  vegetal usado), identificando cual muestra correspondía a cada marca en la placa.   A continuación se aplicaron 20 mL de la fase móvil (n-hexanoéteretílico:ácido acético glacial)a la  cromatoplaca y se insertó en la  cámara de  cromatografía  el tiempo suficiente para que la fase móvil migrara hasta un centímetro antes del borde superior de la cromatoplaca.  

Finalmente la cromatoplaca fue extraída, se le aplicó una solución reveladora (H2SO4-Vainillina)  utilizando un atomizador y se dejó secar, para posteriormente colocarla en una plancha de calentamiento. Durante el calentamiento aparecieron los espectros de color de cada una de las sustancias patrón sobre la cromatoplaca,  y finalmente fue medida la distancia de migración de cada uno de los diferentes componentes y fue hallado su RF.

1. Medición de acidez de una grasa:

Para este proceso fueron tomados 2,5mL de la sustancia problema (Mantequilla y aceite viejo) los cuales fueron solubilizados en 12 mL del solvente, y de esta mezcla se tomaron 5mL, a los cuales se les adicionaron 0,5mL de fenolftaleína. La mezcla total fue titulada con KOH 0,1M hasta que ésta se tornó rosa pálido por más de 30 segundos. A continuación se midió la cantidad de KOH utilizada y se determinó el índice de acidez de la grasa.

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