Farmacologia

1. QUE ES LA PCR:

Es una técnica "in vitro" que imita la habilidad natural de la célula de duplicar el ADN.

OBJETIVO:

Permite a los científicos tomar una muestra que contenga solamente una mínima cantidad de ADN y replicar esta secuencia hasta conseguir millones de copias, en lugar de las una o dos originales.

(http://www.bmbq.uma.es/lbbv/index_archivos/presentbiotec/6-PCR-6.pdf)

PARA QUE SIRVE:

Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado.

COMO SE HACE?

Primer paso: Se calienta un trozo largo de ADN que contenga el pequeño fragmento que debe ser copiado. Las dos hebras pueden ser separadas una de otra calentando a elevadas temperaturas (y volverían a unirse lentamente si se dejase enfriar).

Segundo paso: Se añaden los iniciadores (primers)

Los iniciadores son nucleótidos que constituyen una corta secuencia de la nueva hebra. Los iniciadores se enganchan a los extremos del segmento de ADN que debe ser copiado.

Tercer paso: Amplificación

calentamos para separar los dos dobles segmentos y convertirlos en cuatro simples, añadimos más iniciadores y nucleótidos, y dejamos enfriar de nuevo. La enzima polimerasa copia el ADN empezando por el iniciador, que sirve para hacer una nueva copia de cada segmento diana. Al final tendremos cuatro fragmentos dobles del ADN que queremos multiplicar.

(http://www.botanica.cnba.uba.ar/Pakete/Dibulgeneral/PCR/PCR.htm)

2. RFLP (Polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción

QUE ES?

Los RFLP son marcadores genéticos del ADN y se pueden encontrar en regiones que codifican proteínas o exones, en los intrones o en el ADN que separa un gen de otro. Lo único que se necesita para que puedan ser marcadores genéticos es que sean polimórficos teniendo más de un alelo.

CUAL ES EL OBJETIVO?

Permitir la comparación de patrones de bandas mediante la digestión cn enzimas de restricción del ADN patrón.

COMO SE HACE?

Para desarrollar eso se requieren los siguientes pasos:

1. AISLAMIENTO DEL ADN: Es el primer paso en las tecnologías moleculares, para extraer el ADN del sitio en que se halla.

2. DIGESTION DE RESTRICCION Y ELECTROFORESIS: Cada enzima de restricción, en condiciones apropiadas, reconocerá el ADN y lo cortara de manera predecible, dando lugar a un conjunto reproducible de fragmentos de ADN se diferentes longitudes. Los fragmentos son separados comúnmente mediante electroforesis en geles de agarosa.

3. TRANSFERENCIA DEL ADN POR EL METODO DE SOUTHEM: Primero se desnaturaliza el gel en una solución básica, se coloca sobre este una membrana porosa de nylon o de nitrocelulosa y al conjunto de le superpone un peso. Los fragmentos que estaban en el gel se transfieren, como cadenas simples a la membrana por acción capilar.

4. HIBRIDACION DEL ADN: La membrana con el ADN patrón se incuba con la sonda de ADN. Las condiciones de incubación son tales que si las cadenas de ADN de las membranas son complementarias a la de la sonda, se dará

...