Fundamentos Y Tipos De ELISA

Fundamentos y Tipos de ELISA

Autor: Cultek, S.L.U

El ELISA es una técnica que se basa en el uso de un antígeno o un anticuerpo marcado con una enzima; al estar uno estos componentes marcado y fijado a un soporte, se interrumpe la reacción antígeno-anticuerpo, posteriormente se le agrega un sustrato especifico sobre la enzima que producirá un color determinado observable a simple vista o cuantificable por un espectrofotómetro o analizar la reacción antígeno anticuerpo. Existen diversos tipos de ELISA los que se marca el anticuerpo: directo, indirecto, sándwich: Doble, Heterólogo.

En cuanto a los pasos generales de un ELISA primero se tapizada el antígeno o anticuerpo, luego se agrega la muestra problema con la mezcla de antígenos o anticuerpos, se une el antígeno o anticuerpo específico al anticuerpo o antígeno ya tapizado, lavado para eliminar el exceso no unido. Adición del anticuerpo secundario marcado con la enzima , unión del anticuerpo secundario al antígeno o anticuerpo ,lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no adherida , adición del substrato, unión del substrato a la enzima, para luego obtener la coloración color

ELISA directo: En este se fija el antígeno al soporte, se lava para eliminar los no fijados, luego se adicionan los anticuerpos marcados con la enzima para que reacción con el antígeno y que solubilizado el complejo, se lava para eliminar anticuerpos que no reaccionaron y se agrega un sustrato específico para la enzima, al final se observa la coloración. ELISA indirecto: En este la diferencia viene dad que a nivel que el elemento marcado por la enzima es un anti-anticuerpo que va a reaccionar con el anticuerpo, que reacciono junto al antígeno previamente fijado; finalmente agrega un sustrato específico para la enzima, se lava y se observa la coloración.

ELISA sándwich doble: Se fija al soporte el anticuerpo específicos del antígeno en el suero problema, posteriormente se añade el suero problema y los antígenos de fijan a los anticuerpo, luego se lava para eliminar elementos no fijados, posteriormente se añaden anticuerpos conjugados con una enzima(de diferente epítopo a los previamente fijados) estos reaccionan con los antígenos de la muestra problema que se encuentran fijados a los otros anticuerpos, se lava la muestra y se añade un sustrato a la enzima marcadora y se observa el color visual o por colorimetría, en cuanto al ELISA sándwich triple la diferencia viene dada por que los segundos anticuerpos que se colocan no son marcados con la enzima, si no que luego se coloca anti-anticuerpos conjugados con la enzima que reaccionaran con los anticuerpo que se colocaron luego, posteriormente se lava y se coloca el sustrato especifico para la enzima.

ELISA Competitivo: Fijación de anticuerpos específicos al soporte anticuerpos, adición en concentración conocida de una mezcla de antígenos del anticuerpo utilizado en el paso anterior, marcados con una enzima y antígenos desconocidos (objeto de estudio).Al mismo tiempo, añadir únicamente antígenos del anticuerpo usado en el paso anterior, marcados con una enzima, lavar. Agregar un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar

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