Histoquimica enzimatica

Histoquímica enzimática

Se utilizan para identificar y localizar encimas en células y tejidos.

• Para localizar enzimas en cortes histológicos tener cuidado durante la fijación para preservar la actividad enzimática. Se prefiere el uso de aldheídica débil.
• Se detecta el producto de reacción enzimática.
• Se emplea un reactivo de captura, que puede ser un colorante o metal pesado, para atrapar o fijar mediante precipitación en el sitio de reacción.

• [pic 1]

AB= sustrato

T= agente de atrapamiento

AT= producto final atrapado

B= sustrato hidrolizado

• Mediante este método se pudo equiparar el lisosoma
• Se han desarrollado procedimientos histoquímicos similares con el fin de demostrar fosfatasa alcalina, ATPasas de varios tipos, diversas esterasas y enzimas respiratorias.

Inmunocitoquímica

La especificidad de la reacción entre el antígeno y el anticuerpo es el fundamento de la inmunocitoquímica.[pic 2]

• Anticuerpos (inmunoglobulinas) son glucoproteínas producidas pos células específicas del sistema inmune por respuesta a un antígeno.
• Los anticuerpos pueden purificarse de la sangre y conjugarse con un colorante flourescente

Fluorescente y Fluorescencia[pic 3]

• COLORANTES FLUORESCENTES: sustancias químicas que absorben la luz de longitudes de onda diferentes y emiten luz visible de una longitud de onda específica
• FLUORESCENCIA: absorbe luz ultravioleta y emite luz verde.

Anticuerpos Policlonales y Monoclonales

• ANTICUERPOS POLICLONALES: producidos por animales inmunizados
• ANTICUERPOS MONOCLONARES: producidos pos líneas celulares productoras de anticuerpos inmortalizados de duplicación continua.

Una proteína específica se aísla a partir de las células musculares de una especie y se inyecta en circulación de otra especie

Inmunofluorescencia

• INMUNOLUORESCENCIA DIRECTA: un anticuerpo primario marcado con flourocromo, reacciona con el antígeno dentro de la muestra. Es de un solo paso y comprende un soo anticuerpo marcado. Visualizacion de estructuras no es ideal.

[pic 4]

• INMUNOFUORESCENCIA INDIRECTA: provee una sensibilidad mucho mayor que el método directo y recibe el nombre de “técnica de emparedado”. El fluorocromo se conjuga con un anticuerpo secundario dirigido contra el anticuerpo primario. Es cara y no se adapta fácilmente a procedimientos autmatizados.[pic 5]

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