INFORME DE LAB: IDENTIFICACIÓN DE UNA CEPA INCÓGNITA

[pic 1]     [pic 2]

INFORME DE LAB:

IDENTIFICACIÓN DE UNA CEPA INCÓGNITA

                                                                                                                         Integrantes: Fernanda Farías.

                            Monserrat Vargas.

                 Kasandra Cisterna.

Fecha: 17 de octubre del 2017.

                                                                                                                       Profesora: Constanza Rojas.

1. INTRODUCCIÓN

La microbiología es la rama de la biología que estudia los microorganismos tanto procariotas y virus como eucariotas simples, uni y pluricelulares. Los organismos objeto de esta rama, son sólo aquellos que son visibles al microscopio. Etimológicamente procede del griego mikros (pequeño), bios (vida) y logos (tratado, ciencia)^[1].  Estos microorganismos son fuente continua de sorpresas. Su aparente «invisibilidad» contribuye a incrementar nuestro asombro cuando un microorganismo, o su actividad, se hacen patentes por primera vez^[2].

Se estima que sólo se conoce el 1% de los microorganismos que habitan el planeta por lo que es una rama de la biología en gran expansión, a lo que se añade las grandes contribuciones que ha supuesto para la medicina los descubrimientos e investigaciones realizadas en microbiología^[3]. Es por ello que para determinar el tipo de microorganismo que se pueden presentar en una muestra, se realizan diversas pruebas bioquímicas con el fin de poder caracterizarlo e identificarlo.

1. OBJETIVOS

1. El objetivo principal del laboratorio es poder identificar un tipo de bacteria a través de distintas experiencias que otorguen información para reconocer al microorganismo presente en la muestra.
2. Conocer y aplicar los distintos tipos de siembra para reconocer el microorganismo y aplicar las técnicas de aislamiento utilizadas en microbiología.
3. Aplicar las técnicas de tinción más conocidas.
4. Conocer y utilizar las pruebas bioquímicas para identificar el tipo de bacteria.

MATERIALES Y MÉTODOS

Se realizaron siembras, en medios líquidos, semisólidos y sólidos, en placas de Petri y en tubos, con las técnicas de siembra por estrías, por picadura y homogénea. La muestra obtenida de la siembra con estría se enriquece y se diluye en medio salino, obteniendo un cultivo puro, el cual se sembró por estrías en medios de cultivos selectivos. Estos medios fueron: Agar MacConkey, aisla y la diferencia Enterobacteriaceae y diversos otros bacilo Gram positivos. Ligeramente selectivo. Se producen colonias incoloras o de color rosa a rojo según la capacidad del aislado para fermentar carbohidratos; Cetrimida, es selectivo para Pseudomonas aeruginosa; Levine, medio selectivo para el aislamiento de microorganismos Gram negativos coliformes. Diferencia Escherichia coli y Enterobacterias aerogenas de otras enterobacterias no fermentadoras de lactosa; Baird Parker, selectivo para Staphylococus sp. que utiliza la capacidad de los estafilococos de reducir el telurito a telurio y detectar la lecitinasa; XLD, moderadamente selectivo, aisla patógenos entéricos Gram negativos (Salmonella y Shigella). Inhibe los microorganismos Gram positivos.

Cabe recalcar que los instrumentos y medios utilizados para sembrar deben estar previamente esterilizados y bajo condiciones de asepsia.

Luego se procedió a observar bajo microscopio con distintas tinciones, para esto se realizó una tinción Gram^[4] (Roger Y. Stanier).

Posteriormente se realizan pruebas de antibióticos, donde se aplicó sensi-discos impregnados de antibióticos^[5] (John L. Ingraham, Catherine A. Ingraham) (estos fueron Penincilina, Ácido  Nalidixico y Kanamicina) en una placa petri que contenía agar nutritivo.

Finalmente se procede a las pruebas bioquímicas, estas son: La Gelatinasa, Determina cap. bacteriana de degradación de proteínas. Se realiza en placas con agar gelatina (1%), que se incuban y se les adhieren reactivo Frazier. Si hay formación de un halo transparente rodeando el crecimiento es gelatinasa positiva y si se forma un precipitado blanco alrededor de todo el crecimiento es gelatinasa negativo; La amilasa, determina cap. bacteriana de degradación de almidón, mediante prod. de la enzima amilasa. La prueba se realiza en placas con agar almidón (1%) y a estas luego de ser incubadas se le agrego lugol. Si hay formación de un halo transparente rodeando el crecimiento es amilasa positivo y si se forma una coloración azul-violeta alrededor de todo el crecimiento es amilasa negativo; La catalasa, determina presencia de enzima Catalasa, presente en la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que presentan citocromo c. Si se observa la formación inmediata de burbujas es positiva; La prueba OF,  midiendo la acidez se detecta por la presencia de un indicador de pH (azul de bromotimol), que hace virar el medio de verde a amarillo; La oxidasa, determina presencia de la enzima oxidasa. Si se torna de color violeta es positiva mientras que cuando queda incoloro es negativa y la Agar hierro Kliger Detección de consumo de Glucosa y Lactosa. Si se producen ácidos al fermentar, el medio vira a color amarillo, si no, se mantiene rojo. Si hay ácido sulfúrico se formará precipitado negro. Si hay gases se fractura el agar.

...