INHIBICION DE LA ACTIVIDAD DE LA SUCCIONATO DESHIDROGENASA

INHIBICION DE LA ACTIVIDAD DE LA SUCCIONATO DESHIDROGENASA

INTRODUCCION:

La actividad enzimática puede ser disminuida o bloqueada por la acción de ciertas moléculas o inclusive átomos a las cuales se les conoce con el nombre de inhibidores enzimáticos.

Debemos aclarar que no deben ser incluidos en este grupo de sustancias, aquellos agentes que producen simplemente una destrucción irreversible de la enzima, como podrían ser todos aquellos que conducen a su desnaturalización, como por ejemplo los ácidos fuertes.

La inhibición enzimática es de gran importancia fisiológica, ya que a veces la inhibición de una sola enzima que forma parte de una cadena de reacciones metabólicas puede inhibir por completo a todo el proceso metabólico involucrado y ejercer en esa forma un efecto profundo y a veces fatal sobre el organismo. De más está recalcar la importancia que este fenómeno tiene en farmacología y toxicología como así también en el desarrollo de herbicidas e insecticidas. De ahí que el estudio del mecanismo de acción de los inhibidores se haya constituido en una de las más exploradas de la enzimología práctica.

En la presente experiencia práctica investigaremos la inhibición de la actividad enzimática por productos químicos específicos, los llamados inhibidores. El inhibidor específico usado será el malonato.

FUNDAMENTO TEORICO

Los inhibidores pueden clasificarse en dos grandes grupos:

1. Irreversibles. La enzima no recobra su actividad por remoción del inhibidor libre. Esto es debido a que el inhibidor irreversible, actúa por lo general modificando irreversiblemente o aun destruyendo algunos de los grupos esenciales del centro activo

2. Reversibles. La enzima recobra su actividad por remoción del inhibidor libre (por ejemplo por simple diálisis). Lo cual demuestra que hay un equilibrio entre el inhibidor libre y la enzima.

Una molécula inhibidora afecta la actividad enzimática de dos modos: por inhibición competitiva e inhibición no competitiva.

La inhibición competitiva tiene lugar cuando una molécula que es estructuralmente similar al sustrato para una reacción particular, compite por una posición en el sitio de la enzima. Esto hace que la enzima no esté disponible al sustrato. La inhibición competitiva puede invertirse si se eleva la concentración del inhibidor se mantiene constante.

FIGURA 1. Inhibición competitiva

En la inhibición no competitiva, el inhibidor se une a la enzima en sitio que no es el sitio activo, siendo así, cambia la naturaleza de la enzima para que pierda sus propiedades catalizadores. Esto sucede de dos maneras. El inhibidor no competitivo bloquea físicamente el acceso al sitio activo, o causa un cambio conformacional en la proteína, inactivándola. Porque las moléculas del sustrato no pueden invertir la posición de un inhibidor no competitivo, aumentar la concentración del sustrato no invertirá la inhibición.

FIGURA 2. Inhibición no competitiva.

El objetivo de la presente experiencia es demostrar el efecto inhibidor de algunas sustancias sobre la velocidad de reacción enzimática, utilizando para ello malonato, como inhibidores de la succinato deshidrogenasas.

MATERIALES.

- gradillas

- baño maria

- tubos de ensayo15x125

-juego de pipetas 10,5,2 y 1 mL

- Espectrotofometro o fotocolorímetro

- buffer fosfato de sodio 0.1 M pH 7.4

- 2,6 diclorofenolindofenol 0.02%

- succinato 0.1 M

- succinato 0.5 M

- Malonato 0.1 M

- Homogenizado hepático

PROCEDIMIENTO.

• Rotular 5 tubos y colocar los reactivos de acuerdo a la siguiente tabla 1 en cada tubo:

Tabla1. Sistema de preparación y evaluación del efecto inhibidor del malonato.

• Mezclar y dejar en reposo a temperatura ambiente

• Observar y anotar los resultados según el color de cada uno de los

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