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Introducción al laboratorio de Microbiología, esterilzación, desinfección y asepsia


Enviado por   •  28 de Mayo de 2018  •  Trabajo  •  1.693 Palabras (7 Páginas)  •  329 Visitas

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MICROBIOLOGÍA INICIAL 2018-1

LABORATORIO 1:

Introducción al laboratorio de Microbiología, esterilzación, desinfección y asepsia

OBJETIVOS

  • Comprender y aplicar las normas de bioseguridad a tener en cuenta dentro del laboratorio de microbiología.
  • Aprender a manejar microorganismos de forma aséptica.
  • Aplicar técnicas microbiológicas de flameación, filtración por membrana, desinfección y esterilización por calor.
  • Comprobar la efectividad medios de esterilización y de desinfección utilizados en la presente práctica.

INTRODUCCIÓN

Los laboratorios de microbiología son lugares de trabajo especiales, que pueden tener riesgo de contaminación de enfermedades infecciosas para las personas que se encuentran dentro o fuera del laboratorio.

Se utiliza el término “contención” para describir métodos seguros para manejar materiales infecciosos en el laboratorio donde son manipulados y conservados. Se pretende por medio de la contención reducir o eliminar la exposición de quienes trabajan en laboratorio y otras personas fuera del laboratorio.

Según las características de los microorganismos, como su capacidad para producir enfermedad, forma de transmisión, etc. Se pueden clasificar en cuatro niveles de seguridad biológica según la estructura de los laboratorio, equipos de seguridad y microorganismos.

Nivel de seguridad biológica

Ejemplo de laboratorio

Ejemplo de microorganismo

1

Laboratorios de enseñanza

E. coli

2

Laboratorios de hospital primario enseñanza universitaria

Salmonella entérica

3

Laboratorios de diagnóstico especializado

Brucella sp.

Mycobacterium tuberculosis

4

Laboratorios de máxima seguridad

Virus de Ébola

NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

  • Está prohibido fumar, comer, beber, aplicarse cosméticos y tener alimentos en el laboratorio.  
  • El uso de mandil con mangas largas es obligatorio.  
  • En caso de que el estudiante tenga heridas, éstas deben ser cubiertas con gasa.  
  • La mayoría de prácticas requieren el uso de guantes.  
  • NO llevar objetos a la boca.  
  • En caso de derrame de sustancias contaminantes, notificar de inmediato al profesor.
  • Todos los accidentes: heridas, pinchazos o ruptura de recipientes de vidrio deben ser notificados de inmediato.
  • Las puertas y ventanas del laboratorio permanecerán cerradas durante las prácticas.  
  • Todo material corto-punzante debe ser depositado en el recipiente correspondiente.  
  • Todo material contaminado debe ser desechado en el sitio destinado para esto.
  • El acceso al laboratorio de prácticas sólo está permitido a los alumnos que estén inscritos en el curso. No se admiten visitas por razones de seguridad.
  • Se deben usar los mecheros con precaución, no dejando material inflamable cerca y evitando el  posible contacto con cabello y prendas de vestir.  
  • Comprobar que los mecheros se encuentran apagados al abandonar  el laboratorio.
  • Limpiar el área de trabajo con un papel empapado en alcohol antes de abandonar el laboratorio.
  • Lavarse las manos con abundante jabón antes de salir del laboratorio.  
  • Eliminar los desechos de forma adecuada.

MATERIALES

Materiales por grupo:

  • Desinfectante líquido de manos
  • Dispositivo digital para tomar fotos
  • Papel rollo de  papel absorbente (1 por grupo)

Materiales por alumno:

  • Bitácora de laboratorio
  • Mandil de algodón azul
  • Marcador permanente para vidrio

Materiales otorgados por la facultad:

  • Asas microbiológicas
  • Cofia, toca o gorra para cabello
  • Filtro de jeringa estéril
  • Fóforos
  • Alcohol antiséptico
  • Guantes
  • Jeringa estéril
  • Mascarilla
  • Mechero
  • Muestra de E. coli
  • Placas petri
  • Vasos de precipitación

PROCEDIMIENTO

El estudiante debe tener mucho cuidado en no abrir las cajas Petri para evitar su contaminación. Desinfectar el mesón de trabajo al inicio y al final de la práctica, utilizando alcohol antiséptico (al 70%) y papel absorbente.

Primeramente el estudiante debe rotular cada una las cajas con agar nutritivo, incluyendo: La fecha, el número de grupo, el microorganismo sembrado y el número del 1 al 9 respectivamente.

Luego rotulará según corresponda:

Caja 1: Flameo

Caja 2: CN Flameo

Caja 3: Filtrado

Caja 4: CN filtrado

Caja 5: Cloro

Caja 6: CN Cloro

Caja 7: Esterilizador

Caja 8: CN Esterilizador

Caja 9: CN.

Las siglas CN corresponden a control positivo y a control negativo respectivamente.

Durante la realización de las 4 partes de la presente práctica, el estudiante debe siempre trabajar cerca del mechero de alcohol.

MÉTODOS DE SIEMBRA

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Primera parte – Esterilización por flameo

Preparar los materiales que se utilizarán en esta sección: mechero, fósforos, asa bacteriológica de punta redonda, cajas 1 y 2 y caja con muestra de microorganismos.

CAJA 1

CAJA 2

  1. Prender cuidadosamente el mechero de alcohol.
  2. Esterilizar el asa bacteriológica flameando la punta de la misma hasta que tome un color rojizo.
  3. Enfriar el asa en un filo de la caja 1.
  4. Con el asa microbiológica, recoger una colonia de la caja con muestra microbiológica.
  5. Sembrar el la muestra microbiológica en la caja 1 según el dibujo anterior.
  6. Incubar las cajas boca abajo.
  1. Esterilizar el asa bacteriológica flameando la punta de la misma hasta que tome un color rojizo.
  2. Enfriar el asa en un filo de la caja 2.
  3. Con el asa microbiológica, recoger una colonia de la caja con muestra microbiológica.
  4. Esterilizar la muestra flameando la punta del asa hasta que tome un color rojizo.
  5. Sembrar el la muestra microbiológica en la caja 1 según el dibujo anterior.
  6. Incubar las cajas boca abajo.

Segunda parte – Esterilización por filtración por membrana

Preparar los siguientes materiales: mechero, fósforos, asa microbiológica jeringa estéril, filtro de membrana estéril, agua destilada, vaso de presipitación, caja con muestra microbiológica, cajas 3 y 4.

CAJA 3

CAJA 4

Para la preparación de suspensión bacteriana en agua:

  1. Colocar 100ml de agua destilada en un vaso de presipitación.
  2. Esterilizar el asa microbiológica por flameo. Dejar enfriar el asa cerca del mechero.
  3. Una vez que el asa esté fría, con la misma tomar una colonia de la caja con muestra microbiológica y diluirla en el frasco con agua destilada.

Para la preparación del filtro:

  1. Abrir el empaque con el filtro de membrana, sin destaparlo completamente.
  2. Abrir cuidadosamente el empaque de la jeringa estéril.
  3. Destapar cuidadosamente el pistón de la jeringa (mantener el pistón  y la jeringa sujetados con una sola mano).
  4. Enroscar la jeringa en el filtro de membrana.
  5. Colocar cuidadosamente 3 ml de la muestra diluida en la jeringa estéril (recuerde que 3 ml de muestra es un volumen pequeño).
  6. Colocar el embolo en la jeringa, teniendo cuidado de no presionarlo demasiado pues podría derramar la muestra.
  7. Verter 3 gotas de muestra en la caja 3 y taparla. Descarte luego la jeringa con el filtro.
  8. A continuación esparcir la muestra microbiológica en toda la caja con agar nutritivo (caja 3) utilizando el asa microbiológica previamente esterilizada por flameo.
  9. Incubar las cajas boca abajo.

Para la inoculación sin filtro:

  1. Abrir cuidadosamente el empaque de la jeringa estéril.
  2. Destapar cuidadosamente el pistón de la jeringa (mantener el pistón  y la jeringa sujetados con una sola mano).
  3. Colocar cuidadosamente 3 ml de la muestra diluida en la jeringa estéril (recuerde que 3 ml de muestra es un volumen pequeño).
  4. Colocar el embolo en la jeringa, teniendo cuidado de no presionarlo demasiado pues podría derramar la muestra.
  5. Verter 3 gotas de muestra en la caja 3 y taparla. Descarte luego la jeringa con el filtro.
  6. A continuación esparcir la muestra microbiológica en toda la caja con agar nutritivo (caja 4) utilizando el asa microbiológica previamente esterilizada por flameo.
  7. Incubar las cajas boca abajo.

Tercera parte – Desinfección con alcohol

Para esta sección, preparar los siguientes materiales: mechero con alcohol, fósforos, asa microbiológica, cloro, 2 vasos de precipitación.

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