LABORATORIO N°1: ESPECTROFOTOMETRÍA

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LABORATORIO N°1:

ESPECTROFOTOMETRÍA

Bioquímica y microbiología (AMB1117)

Profesor: Leonardo Anabalón

Integrantes: Kamila Contreras, Fabián Oñate, Joaquin Sobarzo

Curso: Bioquímica y microbiología – AMB1117

Abril, 2017

Introducción

Desde hace muchos años se ha usado el color como ayuda para reconocer las sustancias químicas; al reemplazar el ojo humano por otros detectores de radiación se puede estudiar la absorción de sustancias, no solamente en la zona del espectro visible, sino también en ultravioleta e infrarrojo. Se denomina espectrofotometría a la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe un sistema químico en función de la longitud de onda de la radiación, y a las mediciones a una determinada longitud de onda. La teoría ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo de cuantos de energía llamados fotones; la luz de una cierta longitud de onda está asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad definida de energía.

La espectrofotometría es la interacción de la luz con gran cantidad de especies químicas que permitirá identificar y cuantificar analitos, espectrofotometría significa medida del espectro de la luz y se refiere a la medida del tipo de cantidad de luz que se obtiene de una disolución.

Objetivos

• Identificar los principales pasos para aprender a hacer espectrofotometría
• Reconocer el adecuado funcionamiento del espectrofotómetro
• Comprender el funcionamiento del espectrofotómetro en calidad de tiempo

Materiales

• 6 gramos de acelga.
• Mortero.
• 10 ml de acetona.
• Embudo simple.
• Papel cromatrografico.
• Pipeta.
• Papel filtro.
• Matraz Erlenmeyer.
• Tubos de ensayo.

Procedimiento

1. En un grupo de 4 personas se comienza a proceder a macerar los 6 gramos de acelga, con el uso de mortero.
2. Luego de realizada esta etapa se agregan 10 ml de acetona (para solubilizar y separar pigmentos) a la muestra previamente macerada y se deja reposar por 10 min.
3. Luego se lleva el resultado al embudo previamente montado con papel filtro donde se separa el material solido del líquido (se esperan 15 minutos)
4. Luego de realizada la separación se procede a agregar papel cromatógrafo, con cuidado de no ensuciarlo con otras sustancias, al matraz Erlenmeyer.( se espera unos minutos)
5. Mientras tanto, realizamos un “blank-zero” con acetona, en el equipo, para que no nos arroje la absorbancia de la sustancia que no es de interés de estudio.
6. Realizado el paso anterior, según nuestra apreciación cortamos en tiras el papel cromatografico, según la diferencia de colores que presenta, dejamos estas tiras en un tubo de ensayo.
7. Se extraen los pigmentos del papel con acetona en dos tubos de ensayo
8. Se procede a montar el equipo e introducir los pigmentos, mostrando los resultados de las tiras de papel.

Resultados.

En este experimento se obtuvieron pigmentos fotosintéticos de una hoja de acelga y las distintas longitudes de onda que absorben estos. Para ello a gran escala se realizaron dos pasos, uno consistió en la obtención de los pigmentos y la otra en la espectrofotometría.[pic 2]

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