La enfermedad de Chagas

I) RESUMEN

La enfermedad de Chagas es una enfermedad crónica causada por la infección con el protozoo T. cruzi. El parásito es transmitido a los seres humanos por un grupo de insectos de la familia Reduvidae, siendo la Vinchuca (Triatoma infestans) el vector principal (1). La infección también puede transmitirse en forma congénita, por transfusiones sanguíneas o transplante de órganos. Esta infección afecta en grado variable diversos órganos y sistemas, especialmente el corazón y el tubo digestivo (2). La enfermedad es endémica desde el sur de Estados Unidos (3) hasta el centro de Chile y sur de Argentina (2, 4).

La respuesta inmune humoral a la infección, puede ser detectada en forma rápida por el Test ELISA para Chagas III (5). Este ensayo es adecuado para el análisis de un gran número de muestras de suero o plasma, lo que lo hace especialmente útil en Bancos de Sangre y Laboratorios Clínicos.

BiosChile Ingeniería Genética S.A. ha desarrollado el ensayo Test ELISA para Chagas III pensando en aportar al Banco de Sangre un producto confiable, seguro y fácil de usar. Es así como el ensayo se presenta en placas de 96 pocillos desmontables, cada solución y control tiene un color diferente, la solución de dilución cambia de color al agregar la muestra, diferenciando claramente los pocillos que contienen muestras de los que contienen controles y de los que aún no han sido cargados. Además, el sustrato viene premezclado, lo que permite disminuir el número de pasos a realizar.

II) FUNDAMENTOS DEL ENSAYO

El Test ELISA para Chagas III es un ensayo inmunoenzimático en fase sólida para la detección cualitativa de anticuerpos contra T. cruzi. Se realiza en placas cuyos pocillos han sido activados con extractos totales de las cepas de T. cruzi Tulahuén y Mn (6), incluyendo antígenos de membrana altamente inmunogénicos. El recubrimiento de los pocillos se realiza mediante una novedosa tecnología consistente en la utilización de un adhesivo biológico que facilita la inmovilización de los antígenos y aumenta la estabilidad de la placa activada (7). Si las muestras analizadas contienen anticuerpos específicos para T. cruzi, éstos formarán un complejo estable con los antígenos que recubren los pocillos. El material unido en forma inespecífica será eliminado por medio del lavado. Durante la incubación con el conjugado, los anticuerpos anti-IgG humana marcados con peroxidasa se unirán al complejo formado. Finalmente, en la etapa de incubación con el sustrato cromogénico, la peroxidasa unida al complejo producirá una coloración que permitirá detectar las muestras reactivas para T. cruzi. La reacción enzimática se detendrá por la adición de ácido sulfúrico, midiéndose luego la intensidad del color en un lector colorimétrico para placas de ELISA.

III) COMPONENTES

Componentes del Test ELISA para Chagas III.

- 2 Placas de ELISA para 96 determinaciones cada una, activadas con una mezcla de antígenos de T. cruzi. Cada placa está compuesta por doce tiras de ocho pocillos que pueden ser utilizados individualmente y es suministrada dentro de un sobre metalizado herméticamente sellado, que contiene un desecante en su interior.

- 6 autoadhesivos para sellar las placas.

- 1 bolsa plástica con cierre hermético para guardar las tiras no utilizadas.

Las soluciones que componen el kit se detallan en la Tabla I:

Tabla I: componentes del Test ELISA para Chagas II

Solución Descripción Color

Conjugado

Dos frascos café con 15 mL de anticuerpo anti-IgG humana conjugado a peroxidasa. Contiene 0,02% de timerosal como preservante.

Anaranjado

Solución de Lavado 25X

Un frasco con 120 mL de solución amortiguadora salina pH 7,5 concentrada 25 veces.

Contiene 0,02% de timerosal como preservante.

Incolora

Diluyente de Muestra

Un frasco con 50 mL de solución diluyente de muestra. Contiene proteínas estabilizadoras y 0,02% de timerosal como preservante.

Violeta

Sustrato

Un frasco café con 30 mL de solución de tetrametilbencidina y peróxido de hidrógeno.

Rosado

Control

Positivo

Un frasco con 2 mL de suero positivo para Chagas. Contiene 0,1% de azida de sodio como preservante.

Verde

Control Negativo

Un frasco con 2 mL de suero negativo para Chagas. Contiene 0,1% de azida de sodio como preservante.

Amarillo

Solución de Detención

Un frasco con 30 mL de ácido sulfúrico 3N.

Incolora

IV) MATERIALES NECESARIOS NO INCLUIDOS EN EL KIT

- Micropipetas y pipeta multicanal (opcional).

- Puntas desechables para micropipetas.

- Agua destilada o desionizada.

- Sistema de lavado automático de microplacas (opcional).

- Lector de microplacas con filtro para 450 nm y filtro de referencia (620 a 630 nm, opcional).

- Estufa de temperatura regulable a 37°C.

V) PRECAUCIONES DE USO

- Utilizar sólo para diagnóstico in vitro.

- Los sueros humanos utilizados como controles han dado resultados negativos para HIV, HBV y para HCV. Sin embargo, se recomienda manipularlos con las precauciones requeridas para muestras potencialmente infecciosas. Ningún método actualmente conocido garantiza la ausencia de agentes infecciosos en derivados de sangre.

- Todos los reactivos y componentes deben estar a temperatura ambiente al momento de ser usados y deben refrigerarse (2° a 8°C) luego de su uso.

- No abra el sobre que contiene la placa hasta que haya alcanzado la temperatura ambiente. Guarde las tiras no

utilizadas junto al desecante, dentro de la bolsa plástica provista para tal efecto; asegúrese que la bolsa quede bien cerrada.

- Los recipientes usados para preparar los reactivos deben estar limpios y libres de detergentes y cloro.

- Use puntas nuevas para cada muestra, control o reactivo.

- Evite tocar la pared del pocillo con la punta de la pipeta.

- Nunca pipetee directamente del frasco original.

- Nunca devuelva restos de reactivos no utilizados a los frascos originales.

- No mezcle reactivos provenientes de lotes diferentes.

- Siempre considere que la reproducibilidad de los resultados depende de la precisión del pipeteo, de la exactitud en los tiempos y temperaturas de incubación y del lavado correcto de los pocillos.

- No utilice objetos metálicos que puedan entrar en contacto con las soluciones.

- No utilice muestras o reactivos contaminados ya que pueden

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