Los Principios Básicos de Cultivo Celular

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Los Principios Básicos de Cultivo Celular

R. Ian Freshney

1. Introducción.. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 4

2. Los Tipos de Cultivo Celular. . . ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 4

2.1. La Explantación Primaria Versus la Desintegración. ... ... ... ... ... ... . 4

2.2. La Proliferación Versus la Diferenciación ... ... ... ... ... ... ... ... .... 4

2.3. La Cultura Organotípica. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 7

2.4. Los Sustratos y Matrices. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 9

3. El Aislamiento de Celdas para la Cultura.. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 9

3.1. La Colección del Tejido Fino y el Transporte. ... ... ... ... ... ... ... ... . 9

3.2. La Bioseguridad y la ética.. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 10

3.3. Sistema De Registro.. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 11

3.4. La Desintegración y la Cultura Primaria.. ... ... ... ... ... ... ... ... . 11

4. Subcultura. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 11

4.1. Duración De La Vida ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... 12

4.2. El Ciclo de Crecimiento. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 12

4.3. La Subcultura Serial. . ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 14

5. Criopreservación ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... 14

6. La Caracterización y la Validación ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... 16

6.1. La Contaminación Cruzada ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... 16

6.2. Contaminación Microbiana ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... 16

6.3. Caracterización. . ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 18

6.4. Diferenciación. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 18

Las Fuentes de Materiales. . ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 20

Referencias. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 21

La cultura de Celdas para Tejido Fino Diseñando, editó por Gordana Vunjak Novakovic y R. Ian Freshney

Derecho de autor 2006 John Wiley e Hijos, el S.A.

El centro para la Oncología y la Farmacología Aplicada, la investigación del cáncer Reino Unido Beatson Laboratories, Garscube Estate, Bearsden, Glasgow G61 1BD, Escocia, Reino Unido, i.freshney@ntlworld.com

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1. INTRODUCCIÓN

El granel del material presentado en este libro asume conocimiento de fondo de los principios y los métodos antiácidos de celda y cultivo de tejidos. Sin embargo, se reconoce que las personas entran en que un campo especializado, como tejido fino diseñando, de muchas disciplinas diferentes y, por esta razón, no pudo haber tenido ninguna formación profesional en cultivo celular. El objetivo de este capítulo es resaltar esos prin-ciples y métodos que tienen relevancia particular para el uso de cultivo celular en la ingeniería del tejido fino. Los protocolos detallados para la mayor parte de estos métodos antiácidos son ya publicado Freshney, 2005 y no se replantearán aquí; el énfasis será más en principios básicos y su aplicación para la cultura tridimensional. Los protocolos específicos para los tipos individuales del tejido fino se replantearán en subsiguientes capítulos.

2. LOS TIPOS DE CULTIVO CELULAR

2.1. La Explantación Primaria Versus la Desintegración

Cuando las celdas son tabicadas de tejido fino del donante, pueden ser mantenidas en varias formas diferentes. Un pequeño fragmento simple de tejido fino que se pega a la superficie de crecimiento, ya sea espontáneamente o se auxilia por recursos mecánicos, un coágulo de plasma, o un componente de la matriz extracelular, como colágeno, usualmente le dará lugar a una consecuencia de celdas. Este tipo de cultura es conocido como un explante primario, y las celdas migrando fuera es conocido como la consecuencia (los Higos. 1.1, 1.2, Ven Plato de Color 1). Las celdas en la consecuencia son escogidas, en primer lugar, por su habilidad a migrar del explante y subsiguientemente, si subcultivaran, por su habilidad para proliferar. Cuando una muestra del tejido fino es desagregada, cualquier mecánicamente o enzymatically (Vea Higo. 1.1), la suspensión de celdas y agregados pequeños que es generado aprenderá de memoria azogue una proporción de celdas capaces de adjunto para un sustrato sólido, formando una monocapa. Esas células dentro de la monocapa que son capaces de proliferación entonces serán escogidas en la primera subcultura y, al igual que con la consecuencia de un explante primario, le puede dar lugar a una línea celular. La desintegración del tejido fino es capaz de generar más grande culturas más rápidamente que la cultura de explante, pero la cultura de explante todavía puede ser preferible donde sólo los fragmentos pequeños de tejido fino están disponibles o la fragilidad de las celdas imposibilita supervivencia después de la desintegración.,

2.2. La Proliferación Versus la Diferenciación

Generalmente, las celdas diferenciadas en un tejido fino han limitado la habilidad al procondenado a cadena perpetua comió. Por consiguiente, las células diferenciadas no contribuyen a la formación de una cultura primaria, a menos que las condiciones especiales se usen para promover su adjunto y preservar su estatus diferenciado. Usualmente es el compartimiento que precede consignado proliferante de un tejido fino (el Higo. 1.3), como fibroblastos de la dermis o la capa epitelial basilar de la epidermis, eso le da lugar al granel de las celdas en uno

4 Dividen en Capítulos 1. Freshney

CULTIVO DE ÓRGANOS

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