MANEJO DE MATERIAL Y MEDIOS PARA CULTIVO CELULAR

1. Explicar el fundamento bajo el cual funciona una autoclave.

El fundamento de la autoclave es que coagula las proteínas de los microorganismos debido a la presión y temperatura, aunque recientemente se ha llegado a saber de algunas formas acelulares, tal como los priones, que pueden soportar las temperaturas de autoclave. Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generación de vapor de agua pero restringiendo su salida, hasta obtener una presión interna de 103 kPa, lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados centígrados.

2. Define los siguientes términos:

• Esterilizar: Destrucción o eliminación de todas las formas de vida microbiana, incluidas las endoesporas.

• Desinfectar: Destrucción de las formas vegetativas de los patógenos, la cual se puede lograr por métodos físicos o químicos.

• Asepsia: Destrucción de las formas vegetativas de los patógenos sobre tejidos vivos.

• Sepsis: Respuesta inflamatoria sistémica causada por una infección.

3. Describe 5 métodos de esterilización.

Dentro de los métodos físicos se pueden encontrar:

• Calor seco: Produce la destrucción de los microrganismos por oxidación de sus componentes celulares, mediante la aplicación de temperaturas muy altas durante tiempos largos. El calor puede ser por:

• Incineración: EL material se coloca en cámaras especiales que alcanzan elevadas temperaturas. Con este método se queman contaminantes hasta reducirlos cenizas. Sirve para esterilizar material contaminado a descartar como bolsas, papel, ropa contaminada, cadáveres, etc.

• Llama directa: Se coloca el material directamente al fuego hasta que se haga al rojo vivo, se logran eliminar los contaminantes reduciéndolos a cenizas, su eficacia depende de la calidad de la llama. Es útil para esterilizar el asa o filamento con mechero rápidamente.

• Aire caliente: Este proceso se lleva a cabo en hornos especiales que permiten la distribución uniforme de calor en su interior, el material se expone a temperaturas aproximadas de 170°C durante 2 horas, pudiendo variar de acuerdo al tipo de material a esterilizar y su termoestabilidad. Es útil para esterilizar material de vidrio, instrumentos quirúrgicos y de laboratorio, agujas de metal y materiales no miscibles con el agua.

• Calor húmedo o esterilización a vapor: Es el más común y es utilizado para todo los materiales que puedan resistir el calor, el equipo clásico es el autoclave. Su mecanismo de acción es por la desnaturalización de las proteínas mediante la elevación de la temperatura en cortos tiempos de esterilización.

4. ¿Cómo funciona una campana de esterilidad y como se usa?

Las campanas de esterilidad o de flujo laminar son recintos que emplean un ventilador para forzar el paso del aire a través de un filtro HEPA barriendo la superficie de trabajo. El flujo de aire puede ser horizontal o vertical.

Los pasos a seguir más comunes al trabajar en la campana de flujo laminar son los siguientes:

• Al iniciar el trabajo:

o Poner en marcha la campana durante 5-10 min, para purificar filtros y lavar la zona protegida.

o Comprobar que el manómetro se estabiliza indicando una presión adecuada.

o Apagar la luz ultravioleta y encender la luz fluorescente.

o Limpiar la superficie de trabajo (pe. Alcohol etílico al 70%)

o Lavarse las manos y brazos antes de entrar a la campana.

• Durante la manipulación:

o Se sitúa todo el material a utilizar en la zona de trabajo (evitando sacar y meter material durante la operación)

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