Medios De Cultivo

I. INTRODUCCIÓN

La esterilización implica la destrucción de todos los microorganismos, incluyendo los esporos. La desinfección supone la destrucción de los microorganismos vegetativos que pueden causar enfermedades o en el contexto de las industrias de alimentos, los que pueden producir alteraciones. La desinfección no mata necesariamente a los microbios.

La operación de esterilización comprende todos los procedimientos físicos, mecánicos y químicos, que se emplean para destruir, a los microorganismos.

En el presente informe, quedan descritos los procesos que empleamos, para la esterilización de los materiales del laboratorio que más adelante emplearemos.

Por la importancia descrita se plantean los siguientes objetivos:

 Saber el uso de las técnicas de esterilización de los materiales.

II. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA:

2.1. LA ESTERILIZACIÓN

Esta operación comprende todos los procedimientos físicos, mecánicos y químicos, que se emplean para destruir, inactivar o retener gérmenes en general y patógenos en particular. A través de esta, los materiales de laboratorio para determinados diagnósticos y los elementos quirúrgicos y la piel del enfermo alcanzan un estado de desinfección que evita la contaminación operatoria. (1)

2.2. MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN:

2.2.1. MÉTODOS FÍSICOS

2.2.1.1. ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO:

• FLAMEO O LLAMA DIRECTA.- Los instrumentos tales como las asas y alambres de siembra y varillas secas se esterilizan calentándolas en la llama de un mechero bunsen hasta que se ponen al rojo. Los micros incineradores se recomiendan para esterilizar asas de inoculación contaminadas con material muy infeccioso (espulos tuberculosos) para evitar el riesgo de chisporrotear partículas contaminadas sobre las zonas de alrededor. (2)

• AIRE CALIENTE.- Se realiza con un horno especial que toma el nombre de horno microbiológico u horno Pasteur.

2.2.1.2. ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDO:

• VAPOR DE AGUA SIN PRESIÓN.- Consiste en colocar el material a esterilizarse a la acción del vapor de agua y a temperatura no mayor de 100ºC. Para este fin se puede utilizar la autoclave, manteniendo la espita abierta. Se usa para esterilizar sustancias que de otra manera se altera o destruye a elevadas temperaturas como la leche.(3)

• VAPOR DE AGUA CON PRESIÓN.- Se requiere de un aparato llamado autoclave. El material a esterilizarse se somete a 15lb/pulg2 de presión y 121º C x 15 min. Se emplea para la esterilización de medios de cultivo y otros materiales.(3)

• AUTOCLAVE:

Una autoclave es un instrumento que permite la esterilización por calor tanto de sólidos como de líquidos. La esterilización se realiza habitualmente a 121 º C, 1 atmosfera de sobrepresión durante un tiempo superior a 20 min. Una autoclave de uso normal en el laboratorio de cultivo de tejidos suele disponer de temporizador y regulador de presión, y en algunos casos de un ciclo de secado para permitir secar el material sólido (material de vidrio, instrumentos quirúrgicos, tubos). (3)

2.2.2. MÉTODOS QUÍMICOS:

• Con el alcohol: Podemos esterilizar materiales utilizando el alcohol, ya que es un método práctico para la limpieza de portaobjetos y cubreobjetos.(3)

III. MATERIALES Y METODOS:

1.- Equipos y materiales:

• Autoclave

• Pipetas.

• Placas petri.

• Tubos de ensayo.

• Matraz.

• Asa de Kolle.

• Papel kraft.

• Pabilo

• Algodón.

• Agua destilada

• Alcohol.

• Estufa.

2.- Métodos:

En el transcurso de esta práctica hemos realizado la preparación de materiales y las siguientes técnicas de esterilización:

• Preparación de materiales:

 Lavamos los materiales con agua y detergente y luego lo enjuagamos con el agua simple.

 Volvemos a enjuagarlo con agua destilada y lo llevamos a la estufa por 15 minutos y una temperatura de 25 °C para que se seque.

 Una vez que sacamos los materiales de la estufa formamos tapones de algodón para tapar las bocas de los materiales y cortamos pedazos de papel kraft para forrarlos (para amarrar utilizamos pabilo) y llevarlos a la estufa y autoclave para esterilizarlos tales como: las pipetas, los matraces, placas petri y los tubos de ensayo.

• Esterilización por vía seca:

Introducimos los materiales preparados al horno Pasteur y esterilizamos a 180ºC durante 1 hora.

Durante la esterilización no abrimos la puerta del horno porque el cambio brusco de temperatura pudo quebrar algunos materiales.

No sobrellenamos el horno para permitir un buen esterilizado con una buena circulación de aire.

Al cabo de dos horas, apagamos el equipo y dejamos enfriar, luego extrajimos los materiales y los trasladamos a la mesa de trabajo.

• Esterilización por vía Húmeda:

 Vapor con presión: Introducimos los materiales preparados al autoclave a 15lb/pulg2 de presión y 120ºC x 15 min. No introducimos material de plástico.

Finalizado el tiempo lo desconectamos y lo dejamos enfriar hasta que la presión marque cero y abrimos lentamente.

• Esterilización de la mesa de trabajo:

La mesa de trabajo la esterilizamos por flameo, o sea por llama directa. Con ayuda del alcohol pudimos rociar alrededor de la mesa y seguidamente encendimos fuego con mucho cuidado.

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