Medios De Cultivo

Medios de cultivo

Introducción:

Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado (es decir, se le añaden organismos) y a continuación incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. El crecimiento de los microorganismos es el cultivo. Un cultivo axénico o puro contiene un único tipo de microorganismos.

Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier microorganismo contaminante.

Los medios de cultivo contienen como mínimo: carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras.

El agar es el principal agente solidificante utilizado en medios bacteriológicos. Se disuelve completamente a 100°C y se solidifica al enfriarse a 40°C.

De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en:

• Líquidos: Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote. Se denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulación.

• Semisólidos: Contienen 0.5% de agar en su formulación. Se utilizan para estudiar la movilidad de las bacterias (presencia o ausencia de flagelo).

• Sólidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulación. Estos medios inmovilizan a las células, permitiéndoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. Las colonias permiten al microbiólogo reconocer la pureza del cultivo; las placas que contengan más de un tipo de colonia no provienen de un cultivo puro. Las placas de agar también se utilizan para la determinación de células viables (recuento en placas).

De acuerdo a su composición, los medios de cultivo pueden clasificarse en:

• Definidos: es aquél medio de cultivo del cual se conoce su composición exacta. Son muy utilizados en estudios fisiológicos. Los medios mínimos son medios definidos que únicamente le proporcionan al microorganismo los nutrientes necesarios para crecer, pero no para desarrollarse óptimamente.

• Complejos: es aquél del cual no se conoce la composición exacta del medio. A menudo, los medios complejos emplean sangre, leche, extracto de levaduras, extracto de carne u otras sustancias muy nutritivas pero de las cuales se desconoce la composición química exacta. Estos medios son muy utilizados para cultivar bacterias desconocidas o bacterias de requerimientos nutricionales muy complejos.

De acuerdo a su función, los medios de cultivo se clasifican como:

• Medios selectivos: Son aquéllos que poseen uno o más componentes añadidos, los cuales inhibirán o prevendrán el crecimiento de ciertos tipos de especies de bacterias y/o promoverán el crecimiento de las especies deseadas. Uno puede ajustar las condiciones físicas de un medio de cultivo tales como el pH, la temperatura, para hacerlo selectivo para los organismos de interés.

• Medios diferenciales: Permiten al investigador distinguir entre diferentes tipos de bacterias con base en alguna característica observable en su patrón de crecimiento en el medio, ya sea por producción de algún pigmento o por cambios de color en el medio debido a indicadores de pH, o por halos de degradación de algún componente en el medio de cultivo.

• Medios de enriquecimiento: Contienen algún componente que permite el crecimiento de cierto tipo específico de bacteria, pero no contienen sustancias inhibidoras.

• Medios enriquecidos: Se emplean para cultivar microorganismos que requieren un gran número de factores de crecimiento. Generalmente contienen extractos biológicos poco usuales como sangre, suero en polvo, extracto de cerebro de res, yema de huevo, etc.

Objetivos:

• Establecer la metodología a seguir para preparación de un medio de cultivo.

• Observar los cambios que se tienen en la clarificación de la melaza de caña.

Materiales:

1. Tratamiento de melazas

• Vasos de precipitados

• Varillas de agitación

• Tubos de centrifuga

• Termómetro

• Ácido sulfúrico

• Superfosfato de calcio

• Mechero

• Melaza de caña

• Refractómetro

• Balanza

• Potenciómetro

• Centrifuga

2. Obtención de mosto de uva e inicio de la fermentación

• Uva

• Bureta

• Vasos

• Varillas

• Fenolftaleína

• Hidróxido de sodio 0.1N

• Pipetas de 5, 10ml

• Refractómetro

• Potenciómetro

• Balanza

• Multímetro

• Metabisulfito de potasio

• Depósitos

Métodos:

1. Procedimiento para el tratamiento de melazas

Realizar el acondicionamiento de la melaza de caña para la preparación de mostos o medios de cultivo, efectuando la clarificación por los tratamientos que se mencionaran.

Caracterizar la melaza antes y después del tratamiento determinando los Bx°, pH y azucares reductores totales, esta última según método de Eynon Lane y Munson Walker.

a. Tratamientos de clarificación

Método acido caliente: Consiste en diluir miel 1:1 en peso, calentar durante 30minutos a 80°C, ajustar el pH mediante H2SO4 a 3.5, calentar de nuevo a 80°C durante 60 minutos, se deja sedimentar y enfriar durante 12 horas y luego se centrifuga.

Dilucion de la melaza al 20% en peso, a un pH de 4: Calentar a 95°C durante 30 minutos, decantar después de 5horas y centrifugar a 2000 rpm durante 20 minutos. Se recomienda el uso de superfosfato de calcio al 6%.

2. Procedimientos para la obtención de mosto de uva e inicio de la fermentación

Realizar la obtención de mosto de uva para la obtención de vino tinto y blanco según lo señalado.

Determinar los Bx, pH, acidez titulante, usar el refractómetro y mosimetro respectivamente. Acondicionar el mosto con SO2 para iniciar una fermentación con flora nativa.

a. Obtención del mosto de uva:

Para obtener el mosto se ha de trabajar en un equilibrio que nos permita conseguir los aromas agradables, sin extraer los herbáceos (hexanol y aldehídos C6). Es decir, disponer de sistemas que favorezcan únicamente los intercambios positivos entre zumo y partes sólidas.

La mejor obtención del mosto se consigue combinando la rotura mecánica de la pared celular

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