Medios De Cultivo

METODOLOGIA

1. Muestra madre

Se debe obtener una muestra madre que contenga el alcohol que, mediante la bacteria, se transformara en ácido acético.

2. Preparación de los medios de cultivo

a. Medio GYP

- glucosa (2% m / v)

- Acetato de Sodio.3H2O (0,5% m / v)

- Peptona(0,5% m / v)

- La levadura extracto (0,5% m / v)

- Fosfato de potasio (0,1% m / v)

- Solución Tween 80(0,5% v / v)

- Agar (1,7% m / v)

- El pH de se ajustó a un pH de 6,8.

- Suspender el polvo en agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando para evitar la solidificación durante 1 o 2 minutos. Distribuir y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.

b. Manitol

- manitol 2.5%

- extracto de levadura1%

- agar 1.5%

- Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos. Distribuir y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.

c. Medio WL diferencial

- extracto de levadura, 0.4%

- triptona 0.5%

- dextrosa 5%

- fosfato de potasio 0.055%

- sulfato de magnesio 0.015

- cloruro de calcio 0.0125%

- cloruro de potasio 0.0425%

- cloruro de hierro (III) 0.00025%

- sulfato de manganeso 0.00025%

- verde de bromocresol 0.0022

- agar 1.7%

- Suspender el polvo en agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando para evitar la solidificación durante 1 o 2 minutos. Distribuir y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.

3. Método de Aislamiento

- Se sembrara por el método de estrías en medio GYP bacterias de la muestra madre y se dejo incubando a 35 ºC por 48 hrs.

- Se procederá a tomar las bacterias del medio GYP y se colocara en caldo enriquecido con tres distintas concentraciones de etanol 0.2, 0.6 y 0.8%; se dejara incubando por 24 hrs a 35ºC.

- Se tomara las muestras de las diferentes concentraciones de etanol y se sembraran por el método de estriado en medio manitol durante 48 hrs a 35ºC.

4. Identificación de las cepas

Las colonias serán teñidas por el método Gram convencional, para su reconocimiento ya que la bacteria acetobacter al se gram negativa se teñirá de color rojizo.

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