MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS TINCIÓN DE GRAM

[pic 1]                                 UNIVERSIDAD SAN JOSÉ

SEDE: SAN JOSÉ

ESCUELA DE TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS

ALUMNA: LECSY AMADOR SÁNCHEZ

CÉDULA: 1-1650 0597

INFORME DE LABORATORIO

PRÁCTICA N° 1: TINCIÓN DE GRAM

PROFESOR: FREDDY CASTRO HIDALGO

CURSO: MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

CÓDIGO: TA-31

III CUATRIMESTRE

FECHA: JUEVES 12 DE OCTUBRE DEL 2017

INTRODUCCIÓN

La Tinción empleada en microbiología para la visualización de bacterias en muestras clínicas. También se emplea como primer paso en la diferenciación bacteriana. El examen con microscopio óptico de preparación con tinción de Gram se emplea de rutina para determinar la forma de las bacterias. Las formas comunes son cocos (esféricas), bacilos (alargadas) y formas esporuladas.

 Las bacterias pueden diferenciarse con esta tinción en dos grupos. Los microorganismos Gram positivos se tiñen de morado y las gram negativas se tiñen de rosado.

El valor diagnóstico de esta tinción es variable; normalmente permite una buena orientación al microbiólogo para seleccionar las técnicas de cultivo más adecuadas y también tiene valor en orientar hacia un diagnóstico etiológico, en especial para instaurar un tratamiento inicial

OBJETIVO GENERAL:

• Mostrar la importancia de una tinción para la diferenciación de bacterias basándose en las muestras tomadas anteriormente de los baños de la Universidad, aplicando el mecanismo de la coloración de Gram.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:

• Utilización de técnicas sencillas para la observación de microorganismos.
• Conocer el manejo del microscopio óptico para la observación de bacterias (importancia del aceite de inmersión).
• Aplicación de una técnica de coloración diferencial para la identificación de bacterias Gram positivas y Gram negativas.

RESÚMEN

La tinción de Gram es una prueba útil y de fácil realización que permite diferenciar las dos principales clases de bacterias con el objeto de instaurar un tratamiento. Se colocan sobre un portaobjetos bacterias fijadas por calor o secadas de algún otro modo y se tiñen con cristal violeta a continuación, se añade una solución de Lugol que actúa como mordiente para formar el complejo y luego se realiza un lavado con un agente decolorante (alcohol acetona) con el fin de eliminar el colorante no fijado. Posteriormente se cubre con un colorante de contraste safranina, para teñir de rojo las células que no hayan retenido el cristal violeta. Todo este proceso tiene una duración inferior a 10 minutos.

Palabras clave: Gram positiva, Gram negativa.

MATERIAL Y EQUIPO

• Laminas portaobjetos
• Asa bacteriológica
• Microscopio Óptico
• Mechero de Bunsen
• Puente para tinciones
• Goteros
• Lápiz graso

REACTIVOS

• Cristal violeta
• Alcohol acetona
• Solución de lugol
• Safranina
• Aceite de inmersión

PROCEDIMIENTO

• Encender el mechero de Bunsen.
• No tuve que limpiar el portaobjetos porque ya lo estaba.
• Esterilice el asa bacteriológica, y coloque una gota de agua en el portaobjetos.
• En la lámina portaobjetos trace un circulo como indicador con el lápiz graso.

• Con el asa después de haberla esterilizado en la flama, tomé una pequeña muestra de la cepa y la diluí en el portaobjetos. Posteriormente, esterilice el asa nuevamente.
• Fije la muestra al calor, flameándola en el mechero con mucho cuidado y luego coloque el portaobjetos sobre un soporte.
• Cubrir el portaobjetos con cristal violeta durante 1 minuto exacto. Luego del minuto descarte el cristal violeta con agua.
• Luego se agregó el lugol dejándolo igual un minuto exacto. Posteriormente lo decolore con alcohol acetona.
• Luego se le coloco safranina e igual se dejó un minuto exacto. Se lavo con agua y se secó con el mechero.
• Observar en el microscopio colocándole una gota de aceite de inmersión.

RESULTADOS Y OBSERVACIONES

[pic 2]                                                            [pic 3]

Muestra torondeada por mi de las maniguetas           Placa seleccionada para hacer la tinción de GRAM

de las puertas del baño de abajo de mujeres.

[pic 4]   Tomando la muestra de la placa que contenia coliformes

[pic 5]                [pic 6]     [pic 7]

Colocación del cristal violeta          Colocación del reactivo lugol       Decoloración con el acohol acetona

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