MORFOLOGIA Y TINCION EN MICROORGANISMOS

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MORFOLOGIA Y TINCION EN MICROORGANISMOS

JHEYSON GALLARDO GUERRERO 2015138043

BRITNEY OÑATE OÑATE MASEA 2020138019

MILAGRO MARIA SANCHEZ RADA 2016238021

JESUS MAURICIO VILLAR GUERRERO 2016138087

Estudiantes del Programa de Biología, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad del Magdalena1 Carrera 32 No. 22 –08. Apartado Postal 2-1-21630. Santa Marta D.T.C.H., Colombia.

RESUMEN

Las bacterias son microorganismos que poseen un tamaño pequeño, para su visualización es necesario de tinciones Biológicas y herramientas como el microscopio, de esta manera se observa la estructura y funciones biológicas. En este informe se describe la práctica experimental realizada en el laboratorio de microbiología en la Universidad del Magdalena, esta consistió en la determinación de bacterias que se encontraban en un cultivo, basada en la Tinción simple, la cual se utiliza rutinariamente en los estudios microbiológicos. Se observo su morfología, agrupación y reacción al Gram, en dos grupos taxonómicos Gram positivas y Gram negativos, con la ayuda del microscopio óptico se pueden observar a simple vista, en esta práctica se consigue ver las bacterias amplificadas en cuanto a su tamaño real debido a los diferentes tipos de lentes utilizados mediante el microscopio, con el fin de determinar las bacterias y observar morfología, agrupación y clasificación. se mencionarán la metodología y técnicas de tinción que fueron utilizadas en laboratorio de microbiología, así como la interpretación e identificación de bacterias de dos tipos de cultivos.

PALABRAS CLAVES: Bacterias, Reactivos, Gram positivas, Gram negativos, Grupos taxonómicos, Tinción.

ABSTRACT: Bacteria are microorganisms that have a small size, for their visualization it is necessary to use biological stains and tools such as the microscope, in this way the structure and biological functions are observed. This report describes the experimental practice carried out in the microbiology laboratory at the Universidad del Magdalena, which consisted of the determination of bacteria found in a culture, based on simple staining, which is routinely used in microbiological studies. Their morphology, grouping and reaction to Gram were observed, in two taxonomic groups Gram positive and Gram negative, with the help of the optical microscope they can be observed with the naked eye, in this practice it is possible to see the bacteria amplified in terms of their real size due to to the different types of lenses used by means of the microscope, in order to determine the bacteria and observe morphology, grouping and classification. The methodology and staining techniques that were used in the microbiology laboratory will be mentioned, as well as the interpretation and identification of bacteria from two types of cultures.

KEY WORDS: Bacteria, Reagents, Gram positive, Gram negative, Taxonomic groups, Staining.

INTRODUCCIÓN

Una de las características más importante de las bacterias es su morfología, definida por el tamaño, la forma, el arreglo y la estructura. Estas características pueden determinarse examinando muestras al microscopio. Cuando se dispone de un microscopio de luz, se pueden teñir las bacterias para facilitar su visualización. En microbiología el microscopio se utiliza de forma rutinaria, ya que proporciona importante información para la identificación temprana y definitiva de los microorganismos (Decré et al. 2000). Se le denomina tinción al proceso y resultado de teñir, en la Microbiología es un proceso que consiste en teñir células o microorganismos, es una técnica empleada en los laboratorios con el fin de optimizar la observación través del microscopio, por tanto, se le aplica un colorante al material en estudio para que sea más fácil detectar determinados microorganismos. Las tinciones son unos de los aspectos más importantes, y es el primer paso para la determinación de microorganismos, ya que una vez identificadas sus características, como su morfología (cocos, bacilos, etc.), agrupación (tétradas, cadenas, etc.), y su clasificación (Gram positivos, Gram negativos, etc.); con esto será posible realizar las pruebas bioquímicas pertinentes. Por lo tanto, el primer paso en toda determinación de microorganismos es realizar una correcta tinción (López et al. 2014). Existen bacterias con forma redondeada denominadas cocos, en forma cilíndrica, denominadas bacilos y una tercera morfología como son las que tienen forma de espirales, denominadas espirilos. A su vez cada categoría puede subclasificarse con base a diferentes arreglos. Estas características pueden determinarse examinando muestras al microscopio. Una tinción diferencial usada en bacterias es la tinción de Gram, dependiendo del resultado de esta tinción las bacterias pueden dividirse en dos grandes grupos: las Gram positivas aparecen de color morado y las Gram negativas de color rosa. Esta diferencia en la respuesta a la tinción de Gram se debe a diferencias en la estructura de la pared celular de dichas células (Gutiérrez et al. 2020).

A continuación, se mencionarán la metodología y técnicas de tinción que fueron utilizadas en laboratorio de microbiología, así como la interpretación e identificación de bacterias de dos tipos de cultivos.

MATERIALES Y METODOS

Para la identificación de distintas morfologías y reacciones de las células bacterianas empleadas en laboratorio se utilizó un solo método, la de tinción de gram. Inicialmente se realizó la preparación del frotis bacteriano utilizando dos portaobjetos con ayuda de un marcador permanente se rotularon las preparaciones a utilizar. Posteriormente, se depositaron de 1 a 2 gotas de agua destilada sobre dos portaobjetos para la extensión de los inóculos. Se requirió de un asa de siembra esterilizada por calor para extraer porciones pequeñas de las colonias bacterianas cultivadas (estas colonias se determinaron como muestra #1 y muestra #2) las muestras extraídas de las diferentes colonias se depositaron en el centro de cada portaobjeto. Seguidamente se hizo el extendido de la muestra utilizando un asa de siembra, el extendido se realizó en formas circulares hasta cubrir la mayor parte delimitada por el portaobjetos, para la fijación del extendido se requirió de un mechero, las muestras fueron acercadas al calor hasta que la humedad del agua destilada se disipara. Durante la realización de tinción de gram se utilizaron los dos frotis anteriormente preparados, cada uno correspondió a la muestra del cultivo #1 y muestra del cultivo #2 respectivamente, se depositaron sobre una rejilla y seguidamente se tiñeron con el colorante cristal violeta durante 1 minuto. Continuo a ello se retiró el colorante y se lavaron con agua destilada cada una de las muestras. Seguidamente se aplicó una solución de alcohol-acetona por unos 10-30 segundos, nuevamente se lavaron las muestras, se tiñeron una vez más con el contraste safranina durante un minuto, se lavaron las muestras y finalmente, se secaron l y se expusieron en un periodo corto a calor empleando el mechero. Las muestras preparadas para montaje en microscopio se observaron en los objetivos de 10X, 40X y 100X (en este objetivo se empleó aceite de inmersión). Se identificaron las diferentes morfologías y agrupaciones en cada muestra las cuales fueron representadas en la tabla1. Fontalvo, J. L. (2020)

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