Medios y métodos de cultivo

MEDIOS Y MÉTODOS DE CULTIVO

GONZALEZ-MORALES, Ana María; ROA-GUTIERREZ, Nelcy Yurleiny.

Universidad de la Amazonia, Facultad de Ciencias Básicas, Programa Biología, Curso de Microbiología, sexto semestre, GA.

INTRODUCCIÓN

Los medios de cultivo son un conjunto de nutrientes, que tienen factores de crecimiento para crear las condiciones necesarias para el desarrollo de microorganismos. Esta diversidad metabólica es tan grande que la variedad de métodos de cultivo es enorme provocando que no exista un medio de cultivo universal para todos ellos, por eso, existen diferentes tipos de medio de cultivos que se encargan de proporcionar condiciones de crecimiento óptimas para tipos específicos de microorganismos, por ejemplo, los medios generales se encargan de permitir el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, también están los medios de enriquecimiento, ellos se encargan de favorecer el crecimiento de un determinado tipo de microorganismo pero sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento de los demás, por otro lado, encontramos el medio selectivo, el cual permite el crecimiento determinado de un tipo de microorganismo pero éste si inhibe el crecimiento de los demás, y por último, los medios diferenciales son los que manifiestan las propiedades que un determinado tipo de microorganismo posee.

La preparación de los medios de cultivo al variar ampliamente debido al tipo de microorganismo que se desea cultivar, es necesario conocer las necesidades nutricionales básicas del organismo a trabajar, por ello, los componentes mas habituales utilizados en los medios de cultivo es Agar, el cual se utiliza en los cultivos como un agente gelificante y es añadido cuando se busca un medio sólido o semisólido, también un cultivo de organismos patógenos necesita de fluidos corporales para que se puedan desarrollar como lo harían en su ambiente natural, por otro lado, se cuenta con extractos, que son obtenidos de diferentes partes de animales(carne, hígado) o también de vegetales(semillas) el cual es procesado para obtener un concentrado sólido como en forma de pasta o polvo, también contiene peptonas que son las que se encargan de otorgar proteínas y por último cuenta con amortiguadores el cual se encarga de evitar que se den los cambios bruscos en el PH y ayudan a mantener un rango optimo para que el organismo sea capaz de tolerarlo (BioCen, 2018).

PRE-LABORATORIO

Según su naturaleza química un medio de cultivo puede ser simple o compuesto, nutricionalmente mínimo o enriquecido y funcionalmente selectivo o diferencial, consulte las diferencias entre los diferentes medios de cultivos.

Cultivo solido: Contiene agar a concentración 1,5-2%, se pone en las placas de Petri. Se usa para aislar colonias o analizar las características de las colonias

Cultivo liquido: Tiene gran variedad de nutrientes y no tienen agentes gelificantes (viscosidad y mayor estructura)

Cultivo semisólido: Contiene agar al 0,5% o menos, su consistencia es como crema y su utilidad es en cultivos de microaerófilo o determinar motilidad.

Consultar cual es el mecanismo de acción de los antibióticos

Los mecanismos de acción son 5:

Inhibidores de la síntesis de la pared bacteriana: encontramos los beta- lactámicos, Penicilina, cefalosporinas, carbapenémicos, monobactámicos y otros como fosfomicina, cicloserina, bacitracina, vancomicina

Alteraciones en la membrana citoplasmática: Polimixinas y daptomicina.

Inhibición de la síntesis de proteínas: En la subunidad 50s encontramos: Estreptogranminas, cloranfenicol, lincosamidas, linezolid y macrólidos. En la subunidad 30s están: Tetraciclinas y aminoglucósidos.

Interferencia en la síntesis de ARN y ADN: Quinolonas, metronidazol y rifampicina.

Inhibición en las vías metabólicas: Sulfonamidas y trimetroprim.

METODOLIGÍA: Esta práctica de laboratorio se dividió en cinco fases: (Preparación de medios, valoración, siembra, identificación y resistencia). En la primera fase, la docente inicio la práctica con una explicación sobre los tipos de agar que son: Agar nutritivo, suelen ser granulados; Agar agar, se encuentran solidos o semisólidos y no agar agar estos son medios líquidos con menor concentración de agar. Posterior a esto, se realizó la preparación del medio agar nutritivo y para conocer la cantidad de gramos a utilizar se realizó la siguiente formula: 500ml*20g/1000 H2O= 10g que equivalen a la cantidad a utilizar para la preparación del medio, se debe obtener una mezcla homogénea y calentar, esto se llevó a la autoclave dejando por 15 minutos a 121°C, para finalizar se depositaron 18mls del preparado a cada caja de Petri.

En la segunda fase (valoración del cultivo), las cajas de Petri contaban con ausencia de artefactos, y se evaluó la productividad (capacidad para recuperar el microorganismo) y la selectividad (capacidad para inhibir el organismo no deseado). En esta fase los dos medios se llevaron sin nada a la incubadora para confirmar su esterilidad. Posterior a esto, se plasmó una línea vertical en las dos cajas de Petri con ayuda de asas estériles que contenía caldo de BHI y cinco estrías paralelas en cuatro cuadrantes, este mismo proceso se llevó a cabo con una caja de Petri que contenía E. coli. por último, se calculó el índice de crecimiento mediante la prueba ICA, el cual se calcula asignando 0,2 a cada estría y se multiplica por el número de estrías de los cuadrantes donde se presentó crecimiento y 1,0 en la estría central si presenta crecimiento. Un ejemplo de esto es: 5+2*0,2 = 1,4 + 1,0 de la estría central = 2,4 ICA.

Durante la tercera fase, se procedió a esterilizar el asa y tomar un inoculo del medio de cultivo transfiriéndolo a una caja de Petri con agar Mac-conkey, formando estrías en 4 cuadrantes, este procedimiento se repitió en una caja de Petri de Agar eosina azul de metileno (EMB) y en una caja de Petri con staphylococcus aureus; en este caso se realizó una línea horizontal y encima de ella una estría, se pusieron los medios de cultivos en una incubadora para observar su crecimiento.

En la cuarta fase, se utilizó una micro pipeta para adicionar los reactivos en la cúpula del test, en la prueba de glucosa de agregó reactivo TDA, el de indol y IND se adicionó reactivo James, en VP se agregó VP1.

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