Microbiologia

Aidín Martínez, Marta León y Gisela González

Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caña de Azúcar (ICIDCA)

e.mail: aidin.martinez@icidca.edu.cu

RESUMEN

Algunos métodos han sido utilizados para el mantenimiento de la colección de levaduras.

La elección de uno u otro tiene como objetivo garantizar la estabilidad de los cultivos;

teniendo en cuenta las dimensiones y posibilidades económicas de la colección. En este

trabajo se empleó la preservación de levaduras en agua destilada estéril por ser un método

sencillo, económico, seguro y, capaz de garantizar la viabilidad de los cultivos por un

período prolongado. Se conservaron 8 cepas de Candida utilis y se aseguró el 100% de

supervivencia de las mismas en dicho sustrato durante tres años, a la vez que no se observaron

cambios en las características fisiológicas y morfológicas de los cultivos.

Palabras clave: preservación, levaduras, agua destilada.

ABSTRACT

Various methods have been used for the maintenance of pure yeast culture collections.

The selection of a proper method aims to guarantee the stability of the cultures, considering

the size and the available funds of the collection. Yeast cultures were preserved in

distilled water in this study, as a simple, economic and safe method, to guarantee the viability

of the cultures by a prolonged period of time. Eight strains of Candida utilis were

kept in this substrate for three years with 100% of viability. Changes in the morphological

and physiologic characteristics of the the strains were not observed.

Key words: preservation, yeast, distilled water.

INTRODUCCIÓN

Entre las diversas funciones de las

Colecciones de Cultivos está la de preservar

de forma idónea los diferentes especímenes.

Para ello existen numerosos métodos de

conservación de cultivos entre los que se

pueden mencionar: cultivos sucesivos en

medios de agar, en aceite mineral, en tierra,

en perlas de vidrio a -70 °C y en agua destilada

estéril, entre otros (1-5). Para la elección

de los métodos se tienen en cuenta

varios factores, según el objetivo de la

colección.

El vertiginoso progreso en materia de

conservación de microorganismos, no ha

impedido que la conservación en agua destilada

estéril continúe acaparando un lugar

de preferencia por ser un método simple,

económico, seguro y capaz de asegurar la

supervivencia de los cultivos por períodos

prolongados (2-10).

De ahí que nuestro objetivo al emplear

dicho método sea el de garantizar la conservación

de cepas de levaduras de interés

industrial por periódos prolongados, sin que

se produzcan cambios en las características

morfológicas y fisiológicas de los cultivos.

MATERIALES Y MÉTODOS

Microorganismos

Se seleccionaron 8 cepas de Candida utilis

(L/3-75-1, L/3-75-5, L/3-75-6, L/3-75-7, L-

3-75-11, L/3-75-12, L/3-75-14, L/3-75-16).

Todas conservadas en la Colección de

Cultivos del ICIDCA.

Preparación del inóculo

Los cultivos fueron crecidos en cuñas de

YPG agar a la temperatura óptima de crecimiento

(30 ºC), durante 24 horas. Después

de este tiempo se inoculó una asada en

tubos de ensayo (previamente esterilizados)

que contenían 6 mL de Malta líquida y se

incubaron durante 16 horas a la misma temperatura.

Preparación de los frascos e inoculación en

agua destilada estéril

Frascos de vidrio (con boca de rosca y tapa

de baquelita) conteniendo 9 mL de agua destilada

se esterilizaron a 15 libras durante 20

minutos. Después de estéril y a temperatura

ambiente se le añadió a cada uno 1 mL del

inóculo de levadura (cuatro réplicas por cepa)

(figura 1) y se almacenaron en refrigeración

(aproximadamente 4 ºC) durante tres años.

Comprobación de la viabilidad

La viabilidad se analizó a los tiempos: inicial,

seis meses y tres años, mediante siembra

a profundidad en placas de Petri previamente

preparadas con medio de cultivo Malta

agar. Se incubaron a 30 ºC durante 24 horas

y se realizaron los conteos para determinar

las Unidades Formadoras de Colonias (UFC)

por mililitro de las cepas en estudio.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

La confiabilidad del método ensayado

en nuestras condiciones quedó demostrada

al verificar que todos los cultivos lograron

permanecer viables después de tres años de

conservados en agua destilada estéril.

48 ICIDCA No.2, 2009

Figura 1. Esquema del proceso de conservación en agua destilada estéril

Las colonias obtenidas durante la siembra

en placas con agar malta se reflejan en la

figura 2, las mismas se comparan con las

descritas en el Manual de Identificación de

Levaduras (11). A simple vista no se detectaron

cambios en cuanto a sus características

morfológicas. Por otra parte no se evidenció

contaminación con otros microorganismos

durante el tiempo de conservación.

En la tabla 1, se muestran los valores de

UFC/mL de

...