Microscopia I

UNIVERSIDAD ANDRÉS BELLO

Facultad de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Biología Celular y Genética

PROFESORES: - Ariel Eduardo Reyes Zambrano

- Laura Guajardo Cáceres

TRABAJO PRÁCTICO N°3

“MICROSCOPÍA I”

(BIO-133)

-02 Octubre de 2013-

INTRODUCCIÓN

OBJETIVOS:

Sobre la base de los conocimientos previamente detallados de manera generalizada, es que realizaremos esta experiencia en el laboratorio para:

 Conocer y describir técnicas generales para el correcto uso de un microscópio.

 Entender principios de formación de imagen, tamaño, y posición de la muestra.

 Reconocer y diferenciar muestras frescas de muestras permanentes, distinguiendo sus tratamientos.

 Identificar diferentes estructuras celulares, en la observación de las muestras, describiendo y señalando las estructuras presentes.

MATERIALES Y MÉTODOS:

MATERIALES:

 Portaobjetos

 Cubreobjetos

 Pipeta pasteur

 Microscopio

 Azul de metileno

 Muestras de intestino delgado, testículo de rata, Elodea nuttallii, cebolla

 Una letra “e”

MÉTODOS:

En este punto hablaremos de métodos generales para todas las observaciones que realizamos con las distintas muestras.

Primero tomamos una muestra para ponerla sobre el portaobjetos, luego, dependiendo del tipo de muestra, colocaremos o no, una gota de azul de metileno, o agua destilada, y cubriremos nuestra preparación con un cubreobjetos.

Una vez preparada la muestra, la pondremos sobre la platina del microscopio, teniendo la precauciónn de que el objetivo que se encuentre en posición inicial, sea el objetivo 4X. Luego ajustaremos los sistemas de enfoque, y el objetivo, hasta obtener una imagen nitidida.

RESULTADOS Y DISCUSION:

ACT. N°1 FORMACION DE LA IMAGEN:

LENTE N.A PODER DE RESOLUCION LIMITE DE RESOLUCION AUMENTO TOTAL

4X 0,1 3,64X10-4 2745 40X

10X 0,25 9,11X10-4 1098 100X

40X 0,65 2,37X10-3 422,31 400X

100X 1,25 4,55X10-3 219,6 1000X

 LONGITUD DE ONDA: 450 nm

 PODER DE RESOLUCION:

 LIMITE DE RESOLUCION:

Primero debemos entender los conceptos a analizar, el poder de resolución se define como la capacidad que permite ver por separado dos puntos situados muy próximos entre si, y el limite de resolución es la distancia minima que debe existir entre dos puntos para ser vistos por separados.

Como discusión de estos cálculos, se puede inferir que entre mas aumente la imagen mediante estos sistemas de lentes, mayor es el poder de resolución, sino fuera asi, la imagen aumentaría y no habría nitidez en esta, por lo tanto no se podrían diferenciar los componentes de lo observado.

También, a medida que aumenta la imagen, el limite de resolución, ya que entre mas cerca se ve la imagen, menor es la distancia entre los puntos observados, si este limite es sobrepasado, la imagen no se verá clara (nítida)

ACT. N°2: CALCULO DEL AUMENTO DE RESOLUCION:

Se colocó una preparación con una metra “e” impresa con tinta sobre el papel, y se observó utilizando el lente objetivo 10X. Al comparar la orientación de la letra en el portaobjetos con la observada en el campo visual (lo que se observa a través del ocular del microscopio), podemos notar que la letra ahora se encuentra invertida en relación a su orientación original.

Este efecto se explica porque los rayos de luz reflejados o emitidos por el objeto en observación (situado fuera de la distancia focal del objetivo) al pasar por este, son refractados y enfocados en un plano que se ubica más allá de la cara opuesta de la lente, obteniéndose una imagen real invertida y de tamaño distinto (mayor) al del objeto original.

Para finalizar la actividad debíamos observar el objeto con el objetivo de 40X, sin embargo, al tratar de enfocar no pudimos observar la letra, ya que la misma era demasiado grande para ser vista con este objetivo.

ACT. N°3: PREPARACIONES BIOLÓGICAS PERMANENTES:

“Fijar un tejido es preservar sus características morfológicas y moleculares los mas parecidas posibles a las que poseía en estado vivo. Es como hacer una fotografía del tejido vivo y poder observarla, tras cierto tratamiento, con un microscopio”

(http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/2-fijacion.php)

En esta oportunidad analizaremos dos preparaciones fijas: tejido N° 12 y ovario de gata (sin numero de tejido) , en los cuales intentaremos identificar las estructuras mas evidentes de cada celula. Esto se logrará,

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