OBSERVACIÓN Y TINCIÓN DE CÉLULAS PROCARIOTAS

OBSERVACIÓN Y TINCIÓN DE

CÉLULAS PROCARIOTAS

MARÍA MERCEDES DITTA QUINTERO

RODIAN FONSECA CAMPUZANO

UNIVERSIDAD DEL ATLÁNTICO

FACULTAD DE QUÍMICA Y FARMACIA

BIOLOGÍA GENERAL

BARRANQUILLA-ATLÁNTICO, 23 DE ABRIL

2014-1

1. RESUMEN

El presente trabajo se realizó con el fin de observar algunas de las características de las bacterias y otros microorganismos desarrolladas en un medio de cultivo y aplicar alguna técnica de coloración para la observación de microorganismos a través del microscopio óptico. Para el primer procedimiento se realizó la técnica para la coloración de una bacteria en donde se empleó la Escherichia coli; con ella se preparó el frotis bacteriano, se fijó al portaobjetos y se le aplico la tinción de azul de metileno. En la realización de este método se observó la bacteria en forma de bacilo. En segunda instancia, se observaron las bacterias que componen al Yogurt. Para esto, se preparó el frotis, se fijó al portaobjetos y se le aplico la tinción violeta de genciana. En la realización de este método no se logró ver con claridad la composición de la muestra, pero lo destinado fue haber observado las bacterias Streptococcus thermophilus y Lactobacilus bulgaricus.

2. INTRODUCCIÓN

Biológicamente el árbol de la vida se clasifica en tres dominios: Archaeas, Bacterias y Eukaryota; en este último se incluyen los reinos: Protista, Fungi, Vegetal y Animal. Las Archaeas son microorganismos unicelulares procariotas parecidas a las bacterias, pero por sus características particulares como su historia evolutiva y, su bioquímica y genética independiente, se les considera una forma de vida más en la tierra. Las Eukaryota incluyen a organismos que constan de una o más células eucariotas, abarcan tanto organismos unicelulares como pluricelulares ambos se caracterizan por tener un núcleo definido delimitado por una membrana al igual que sus orgánulos. Por su parte, las Bacterias son microorganismos unicelulares procariotas que se caracterizan por la carencia de un núcleo delimitado por una membrana, así que el material genético está organizado en un único cromosoma situado en el citoplasma dentro de un cuerpo irregular denominado nucleoide. Igualmente el citoplasma carece de orgánulos delimitados por membranas y por ello presentan pocas estructuras intracelulares aunque se destacan los plásmidos, los ribosomas y las vacuolas. Al igual que las células de las plantas, las bacterias disponen de una pared celular que rodea a su membrana citoplasmática con la diferencia que la pared celular de las bacterias está hecha de peptidoglicano o capa de mureína el cual es el responsable de la rigidez de la pared celular bacteriana y determina la forma de la célula. En cambio, la pared celular de las plantas está constituida por celulosa un polisacárido encargado del soporte estructural.

La forma de las bacterias es muy variada y, a menudo, una misma especie adopta distintos tipos morfológicos, lo que se conoce como Pleomorfismo. De todas formas, podemos distinguir tres tipos fundamentales de bacterias: los cocos que son bacterias en forma esférica y que a su vez de clasifican en: diplococo (cocos en grupos de dos), tetracoco (cocos en grupos de cuatro), estreptococo (cocos en cadenas) y estafilococo (cocos en agrupaciones irregulares o en racimo). Los bacilos que son bacterias en forma de bastoncillo y las formas helicoidales que comprenden los vibrio (ligeramente curvados y en forma de coma, judía o cacahuete) espirilo (en forma helicoidal rígida) y espiroqueta (helicoidal flexible).

La tinción permite cambiar el color de las células de los microorganismos y poder realizar una mejor observación al emplear el microscopio. Existen diferentes tipos de tinción: la tinción simple como el azul de metileno y el cristal violeta y, la tinción diferencial como la tinción de Gram. Algunos pueden utilizarse a concentraciones que no matan las células con lo que permiten observar microorganismos vivos (Colorantes Vitales) pero la mayoría sólo son efectivos después de fijar los microorganismos, es decir cuando están muertos y adheridos al portaobjetos.

3. OBJETIVOS

 Observar algunas de las características de las bacterias y otros microorganismos desarrolladas en un medio de cultivo.

 Aplicar alguna técnica de coloración para la observación de microorganismos a través del microscopio óptico.

4. MATERIALES

 Cultivo de microorganismos realizado con anterioridad

 Un vaso de Kumis

 Azul de metileno

 Solución colorante de cristal violeta

 Colorante de Gran (batería)

 Violeta de Genciana

 Toallas de papel secante o servilletas

 Microscopio

 Aceite de inmersión

 Asa de inoculación punta redonda (aplicadores o hisopos)

 Portaobjetos

 Vaso de vidrio de boca ancha o beaker

 Mechero

 Pipeta

5. PROCEDIMIENTO

5.1. Técnica para la coloración de bacteria

5.1.1. Preparación de frotis bacteriano en el portaobjetos

 Se escogió un portaobjetos limpio y se calentó cuidadosamente pasándolo tres veces sobre la llama del mechero y se dejó enfriar.

 Se esterilizó el asa de punta redonda manteniéndola sobre la llama del mechero hasta obtener un tono rojo vivo.

 Se colocó sobre el portaobjetos una pequeña gota de agua con ayuda del gotero.  Se trasfirió una pequeña cantidad de la muestra del cultivo de Escherichia coli por medio del asa de punta redonda.  Se extendió la muestra sobre el portaobjetos en forma circular.  Se dejó secar la muestra al aire libre.

5.1.2. Fijación del frotis bacteriano

 Para que el frotis quedara fijado o adherido al portaobjetos, se pasó rápidamente cuatro veces el portaobjetos sobre la llama, el lao que contenía la muestra hacia arriba.

 Se dejó enfriar el portaobjetos a la temperatura ambiente.

5.1.3 Tinción del frotis bacteriano

Azul de Metileno

 Se sumergió el portaobjetos en un vaso que contenía agua limpia.

 Con el frotis aún húmedo, se cubrió con algunas gotas de azul de metileno

 Se dejó actuar durante 20 segundos y se escurrió el exceso de colorante.

 Se sumergió varias veces en agua y se escurrió el exceso de agua.

 Se eliminó el resto de agua absorbiéndola con una porción de papel absorbente con el cuidado de no frotar la preparación.

Observación

Con el objetivo de 10X se observaron las bacterias en forma de bacilos prevaleciendo con mucha intensidad el color azul del colorante aplicado en esta muestra, con el objetivo de 40X las bacterias se encontraban

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