PRACTICA DE AGAR SANGRE

Preparación de un medio de cultivo

Agar Sangre

INTRODUCCION

El medio de cultivo es uno de los sistemas más importantes para observar el crecimiento de un microorganismo en sustancias nutricias proporcionadas de manera artificial existiendo una gran cantidad de medios específicos para diferentes familias de microrganismo.

Podemos decir que la microbiología empieza su verdadero desarrollo como ciencia en el momento en que se descubre el microscopio y comienza la observación de los primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios de cultivo y la utilización del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos de inflexión en su evolución.

La primera noticia de la utilización de medios de cultivo nos llega del micólogo Brefeld, que consiguió aislar y cultivar esporas de hongos en medios sólidos realizados a base de gelatina.

Sin embargo, este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamaño) y no fue hasta el año 1878 cuando Lister popularizó un método enfocado al cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio líquido.

Koch realizó sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como soporte nutritivo sólido, pero no tardó en recurrir al caldo de carne líquido, diseñado por Loeffler, al que, en 1881, añadió gelatina, logrando un medio sólido transparente ideal para la observación de la morfología macroscópica de las colonias microbianas.

En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiología en relación con los medios de cultivo: el médico alemán Walter Hesse introduce el agar-agar (polisacárido extraído de algas rojas) como solidificante.

En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clásicas bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.

Estos deben cubrir una serie de condiciones como por ejemplo la temperatura, grado de humedad, presión de oxígeno y correcta acidez o alcalinidad, además, debe contener el grado necesario de nutrientes y estar libre de contaminación.

Uno de los componentes principales para el medio se llama agar, el cual es un elemento solidificante que se licua a temperatura de punto de ebullición y se solidifica a una temperatura de 40°C. Este mismo no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias en la mayoría de los casos y no es atacado por ellas que crecen en él.

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.

OBJETIVO

Aprender la técnica de preparación de medios de cultivo como el agar sangre y familiarizarse con las técnicas empleadas en Microbiología para el cultivo y la manipulación de microorganismos en condiciones de esterilidad.  

MATERIAL

• Agar sangre BD Bioxon (medio de cultivo).
• Matraz Erlenmeyer 500 ml no. 7.
• Probeta graduada
• Balanza analítica.
• Tripie con tela de asbesto.
• Autoclave.
• Agitador de vidrio.
• Vaso de precipitado no. 1000, 600 ml.
• Mechero Fisher.
• Agua destilada.
• 15 placas de Petri.
• Gradilla de laboratorio.
• Tubo de ensayo de 16x150.
• Heparina.
• 10 ml de sangre.
• Jeringa hipodérmica.
• Algodón.
• Alcohol.

PROCEDIMIENTO

En la práctica se detallaron los pasos para la fabricación de un medio de cultivo con base de Agar de Sangre.

Como primer paso se midió el peso en la balanza analítica de 16 gramos de polvo base para la fabricación del agar antes mencionado sobre un papel encerado al cual se le resto el paso señalado antes de agregar el polvo para la fabricación de 400ml de líquido.

[pic 1]

El polvo base se añadió a un vaso de precipitados, posteriormente se midieron 400ml de agua destilada en una probeta graduada y se añadió al vaso de precipitados con los 16 gr añadidos anteriormente.

Se colocó sobre el tripie con el mechero de Fisher encendido para crear la temperatura adecuada y se mezcló muy bien con el agitador de vidrio hasta crear una masa homogénea color ámbar.

[pic 2]

Cuando este en ebullición se retira con guantes especiales para prevenir accidentes o quemaduras y la solución se vacía sobre el Matraz de Earlenmeyer de 500 ml. Se coloca un algodón como tapón, y sobre este se coloca el  gorro realizado con hoja de papel y cinta testigo. Se llevó a esterilizar en autoclave a una temperatura de 121°C a una atmosfera de presión por 35 minutos.

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