PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD

PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD

REPARACION DEL INÓCULO

• Aislar la cepa en medio no selectivo, se debe utilizar un cultivo de entre 18–20 horas de crecimiento.

• Utilizando un palillo o asa desechable, re-suspender en solución salina estéril una colonia del cultivo puro, hasta alcanzar una turbidez de 0.5 Mc Farland utilizando un espectrofotómetro o colorímetro. Esta suspensión equivale aproximadamente a 1x108UFC/ml.

INOCULACION

• Humedecer un escobillón estéril con la suspensión 0.5 de Mc Farland, remover el exceso de fluido contra las paredes del tubo.

• Extender la suspensión sobre el agar MH rotando la caja aproximadamente 60° (tres veces) hasta distribuirlo uniformemente

• Esperar 15 minutos hasta que la superficie del agar este seca.

• Colocar los discos de antibióticos a 20mm de distancia entre discos, asegurarse que estén completamente adheridos al agar e Incubar a 35°C por 16-18 horas.

Solicitados por el docente:

Cepas: ATCC 25922 – ATCC 2753.

Antibióticos: Ampicilina, Amikacina, Ceftriaxona, ciprofloxacina.

Agar Muller Hinton.

Espectrofotometro (Densicheck).

Solicitados por el Estudiante

Batería bioquímica: TSI, lisina, citrato, urea, mio, reactivo de Kovacs.

Mechero

Asas

Escobillones estériles

Tubos o cubetas para espectrofotómetro.

Solución salina estéril

[pic 1]      [pic 2][pic 3]

[pic 4]

E. coli  es resistente a la penicilina e Imipenem debido a la producción de beta-lactamasa y monitorea el sulbactam (componente inhibidor de beta-lactamasa) en el disco, debido a que inactivan estos antibióticos. La mayoría de bacterias gram-positivas secretan sus beta-lactamasas de forma que los agentes antimicrobianos beta-lactámicos son inactivados extracelularmente, en el medio que las rodea. En contraste, las beta-lactamasas de las bacterias gram-negativas permanecen dentro de la célula e inactivan los beta-lactámicos en el espacio periplásmico, esto es, en el espacio entre la membrana externa y la membrana citoplásmica.

En comparación con la Amikacina es activa frente a casi todas las cepas de Escherichia coli resistentes a otros aminoglucósidos más utilizados5. Esta diferencia de sensibilidad radica en su distinta afectación por los enzimas inactivadores de aminoglucósidos4.

En nuestro estudio el imipenem y la amikacina mostraron una excelente actividad in vitro frente a Escherichia coli, de casi el 100%, en el conjunto de las muestras. El imipenem es un antibiótico ß-lactámico de amplio espectro para microorganismos grampositivos y gramnegativos aerobios y anaerobios5. Se administra asociado a la cilastatina, un inhibidor enzimático que impide su destrucción en el riñón. Los aminoglucósidos no son de uso habitual en las infecciones del tracto urinario no complicadas, aunque son eficaces en monodosis en el 90% de las mismas5. Por otra parte, en las infecciones del tracto urinario complicadas la asociación con un ß-lactámico es altamente eficaz4,. Dentro de este grupo de antibióticos, la amikacina es activa frente a casi todas las cepas de Escherichia coli resistentes a otros aminoglucósidos más utilizados5. Esta diferencia de sensibilidad radica en su distinta afectación por los enzimas inactivadores de aminoglucósidos4.

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