Pia de microbiologia basica

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN[pic 1][pic 2]

ESCUELA INDUSTRIAL Y PREPARATORIA TÉCNICA
“ÁLVARO OBREGÓN”

REPORTE DE PRÁCTICA
PIA

INTRODUCCIÓN

Para poder iniciar una práctica donde se va a cultivas un organismo, es necesaria la esterilización de los materiales y el área de trabajo donde se va a realizar el cultivo, este procedimiento es de gran utilidad en el área de la microbiología ya que los microrganismos como otros seres susceptibles a los cambios de condiciones ambientales, es necesario que las condiciones sean semejantes a las de sus hábitats naturales. También se necesita de un medio de cultivo bien conocido como un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento que nos van ayudar a crear el ambiente necesario para que nuestra bacteria pueda crecer.
Para realizar nuestro cultivo es necesario tener mucho cuidado y esterilizar cada vez que sea utilizada nuestra asa, eso evitara que se contamine nuestra caja Petri donde se encuentra la bacteria, cada medio de cultivo que nosotros realizamos es con una estría simple, al terminar se incubara a una temperatura adecuada para su crecimiento.
Al tener lista nuestra bacteria para poder observarla en el microscopio es necesario realizar una tinción simple o tinción Gram, esta es utilizada para teñir paredes bacterianas y que permite diferenciar los dos grandes grupos bacterianos: las bacterias Gram-positivas y las Gram-negativas. La tinción se basa en las diferencias que existen en la composición molecular de las paredes de ambos grupos de bacterias. Después de realizar la tinción podrá ser observada nuestra bacteria por medio del microscopio.
De igual forma se debe tener conocimientos básicos para saber utilizar el microscopio y observar en objetivos 40x y 100x nuestra bacteria.
Esta es la última práctica de la unidad de aprendizaje de microbiología básica, se pone a prueba todo lo que fue enseñado durante el semestre.

Objetivos

En esta práctica de laboratorio buscamos dar un repaso a todas las prácticas que vimos a lo largo de semestre en una sola práctica y así aplicar lo siguiente:

• El reglamento y las medidas de seguridad.
• Aplicar la técnica de esterilización de la mesa de trabajo.
• Utilizar la técnica de tinción simple.
• Aplicar la técnica de observación microscópica.
• Identificar la composición química y usar algunos medios de cultivo.
• Aplicar las técnicas de preparación de diferentes medios de cultivo.
• Aplicar la técnica de vaciado en placa y tubo de ensayo.
• Aplicar las técnicas de sembrado en placa y en tubos de ensayo.
• Desarrollar la técnica de tinción de Gram.
• El uso de agentes físicos y químicos para el control de microorganismos.

Procedimiento

Esterilización de mesa de trabajo:

Materiales                                                                                             Sustancias [pic 3]

• Pinzas
• Lámpara de alcohol
• Algodón
• Gasas

Procedimiento

Mesa de trabajo

1. Preparar una solución de hipoclorito de sodio al 15%.
2. Tomar una torunda de algodón con las pinzas.
3. Agregar al algodón la solución de hipoclorito de sodio al 15%.
4. Distribuir el algodón.
5. Dejar secar el área esterilizada.
6. Colocar una lámpara de alcohol encendida sobre la mesa.

Preparación de medios sólidos y líquidos

Materiales                                                                     [pic 4]

• 1 Matraz Erlenmeyer de 100 mL.
• Probeta de 100 mL.
• Balanza digital.
• Vidrio de reloj.
• Espátula.
• Agua destilada.
• Agar nutritivo.

Procedimiento

1. Leer las instrucciones del fabricantes para cada miedo de cultivo.
2. Pesar la cantidad necesaria de agar nutritivo para preparar 30mL de medio de cultivo.
3. Medir con la probeta el volumen de agua destilada requerida.
4. Mezclar con la probeta el volumen de agua medida anteriormente, agitar hasta observar homogeneidad en la mezcla, adicionar el agua restante y colocar una torunda de algodón.
5. Calentar a ebullición para disolver completamente el Agar. Se debe tener cuidado ya que el recipiente se calienta en exceso y el producto tiende a hervir y proyectarse, lo cual puede producir serias quemaduras. Cuando el agar está completamente disuelto deja de prestar turbidez y se observa clarificado.
6. Etiqueta el matraz que contiene el medio de cultivo, colocar cinta testigo y esterilízalo en la autoclave a 15 lb de presión y 121°C por 15 minutos.
7. Dejar enfriar hasta una temperatura de 45-50°C para vaciado en cajas y/o tubos, en caso contrario dejar enfriar completamente el medio de cultivo y refrigerar hasta su utilización.

Técnica de sembrado en placa

Materiales

• Cajas de Petri con agar nutritivo estéril
• Incubadora
• Termómetro
• Pipetas estériles
• Hisopo
• Asa de siembra
• Masking tape
• Parafilm
• Perillas de hule

Procedimiento

1. Escoge un objeto o superficie como muestra.
2. Con las manos limpias y desinfectadas tomar con mucho cuidado un hisopo estéril, evitando tocar la punta del mismo, e introducirlo en el tubo de ensayo que contiene solución diluyente estéril procurando presionar ligeramente el hisopo en la pared del tubo con un movimiento de rotación para quitar el exceso de solución.
3. Con el hisopo inclinado en un ángulo de 30°, frotar 4 veces la superficie de la muestra seleccionada cada una en dirección opuesta a la anterior.
4. Colocar el hisopo en el tubo que contiene la solución diluyente, quebrando la parte del hisopo que estuvo en contacto con los dedos del mostrador, la cual sebe ser eliminada.
5. Tomar con una pipeta estéril 0.1 mL de la muestra, verterla en la caja de Petri con agar nutritivo y extenderla con la varilla de vidrio en forma de “L”.
6. Sellar la circunferencia de la caja Petri con Parafilm e introducirla a la incubadora en forma invertida.
7. Registrar las observaciones realizadas y los resultados obtenidos.

Técnica de Gram

   Materiales                                                                                                    Sustancias[pic 5][pic 6]

• Porta objetos
• Cubre objetos
• Cristalizador
• Varilla de vidrio
• Piseta
• Muestra

Procedimiento

1. Hacer la preparación, secarla y fijarla como en la práctica anterior.
2. Inundarla en cristal violeta (1 minuto).
3. Lavar enseguida con agua hasta que no salga más colorante.
4. Cubrirla con lugol (1 minuto).
5. Lavar con agua, quitando el exceso con papel secante.
6. Decolorar con alcohol – acetona (30 segundos).
7. Contrastar con safranina (1 minuto).
8. Lavar con agua, secar con papel absorbente o al aire libre.
9. Examinarla con el objetivo 100x.

Resultados y observaciones

[pic 7]

Esta es una foto de lo que pudimos ver en el microscopio después de haber realizado todos los procedimientos anteriores.

En la foto podemos observar cocos.

Conclusión

Hicimos todas las prácticas que vimos a lo largo del semestre en una sola práctica y nos desenvolvimos de una buena manera en el laboratorio, ya que hemos usado todos esos instrumentos y técnicas a lo largo del semestre e incluso unas en el semestre pasado.

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