Practica De Laboratorio Extraccion De Adn Vegetal

Introducción

La práctica la pudimos realizar en un laboratorio de la preparatoria. La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la unión de las proteínas al ADN.

Objetivo

-Realizar la extracción de ADN del tejido vegetal de una banana.

- Observar la estructura fibrilar del ADN.

- Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades quimico-fisicas del ADN.

Material necesario

• 1 tazas o vaso de plástico (por grupo)

• Licuadora

• Una cuchara plástica para medir y mezclar

• 2 filtros de papel de café Nº 2 (conos)

• 20 ml de agua destilada

• Shampoo de color claro

• 1 banana

• Sal de mesa, con o sin Iodo

• 1 pipeta de transferencia plástica o un gotero médico

• 1 tubo de ensayo sellado que contenga 95% de etanol o 91% de alcohol isopropílico

• 1 conservadora con hielo para enfriar los tubos con alcohol

• 1 varilla de vidrio o 1 pipeta Pasteur

Procedimiento

1. En una licuadora, mezclar una banana por taza de agua destilada (250ml).

2. Licuar por 15-20 segundos, hasta que la solución se mezcle.

3. En una taza, preparar una solución consistente en una cucharadita de té de

Shampoo y dos pizcas de sal.

4. Agregar 20 ml (4 cucharaditas) de agua destilada.

5. Disolver la sal y el Shampoo revolviendo lentamente con la cuchara de plástico evitando formar espuma.

6. A la solución preparada en el paso 3, agregar tres cucharaditas de té de la mezcla de banana del paso 1.

7. Mezclar la solución con la cuchara por 5-10 minutos.

8. Mientras uno de los miembros del grupo mezcla la solución de banana, otro miembro pondrá el filtro Nº 2 de café dentro de otra taza de plástico. Doblar el borde del filtro alrededor de la taza para que el filtro no toque el fondo de la taza.

9. Filtrar la mezcla vertiéndola dentro del filtro y dejar que la solución drene por algunos minutos hasta que sean 5 ml aproximadamente de filtrado para testear.

10. Tomar un tubo de ensayo con alcohol frío. Para mejores resultados el alcohol debe estar tan frío como sea posible.

11. Llenar la pipeta plástica con la solución de banana y agregarla al alcohol. El ADN no es soluble en alcohol. Cuando el alcohol se agrega a la mezcla, los componentes, excepto el ADN, permanecen en la solución mientras el ADN precipita en la capa de alcohol.

12. Dejar la solución reposar por 2 a 3 minutos sin mover. Es importante no batir el tubo de ensayo. Se puede observar el ADN blanco el cual precipita en la capa de alcohol.

13. Cuando se obtienen buenos resultados, habrá suficiente ADN para levantar con una varilla de vidrio (el ADN se enrolla a la varilla). O usando una pipeta de Pasteur que haya sido calentada en la punta

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