Laboratorio: Extracción de ADN

EXTRACCIÓN DE ADN

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Fecha: 20/05/2015

Colegio Santa María de Cervellón

Integrantes:

☺ Bastián Barrera

☺ Josefa Vargas

☺ Carolina Aravena

Curso: IV medio A

Profesor: Luis Silva

INTRODUCCIÓN

¿Qué es el ADN? El ADN o ácido desoxirribonucleico es una molécula orgánica compuesta por moléculas de Carbono, Hidrogeno, Oxigeno, Nitrógeno y Fosforo, la cual está presente en todos los organismos vivos, ya que contiene el llamado Gen. El ADN se compone de nucleótidos, conformados por una pentosa o azúcar de cinco carbonos, un grupo fosfato y una base nitrogenada, donde de la última existen cuatro (adenina, timina, citosina y guanina) y es donde se almacena el Gen o código genético.

A continuación se presentara un informe acerca de un laboratorio en el cual el objetivo es extraer una molécula de ADN vegetal de un plátano, y exponerla al microscopio, con el fin de identificar sus componentes y el estado en el cual se encuentra al ser extraído (condensado o descondensado). Esto se logra a través de la utilización de reactivos (detergente, sal, alcohol y jugo de piña) los cuales fueron degradando la célula de plátano hasta obtener la molécula de ADN y así poder fotografiarla en el microscopio.

También se presentarán los aportes realizados por los científicos que plantearon lo que es el ADN, aquellos que lo descubrieron y aquellos que determinaron que el ADN es morfológicamente antiparalelo y que el código genético es universal.

MATERIALES

PROCEDIMIENTO

1. Agregar tres cucharaditas de detergente en el vaso de vidrio.
2. Agregar una cucharadita de sal en el vaso de vidrio.
3. Agregar agua destilada hasta completar el vaso (3/4 aproximadamente).
4. Cortar el plátano por la mitad.
5. Quitarle las hilachas a la mitad que usaremos.
6. Moler esa mitad en la placa de Petri con un tenedor.
7. El plátano molido se coloca en el vaso de vidrio junto a los demás ingredientes.
8. Todo el contenido del vaso se pone en un vaso precipitado.
9. Se coloca un poco de agua destilada en el vaso de vidrio.
10. Se mueve un poco el vaso de vidrio para disolver bien la sal.
11. Se coloca la mezcla anterior en el vaso precipitado junto al resto de los ingredientes.
12. Se bate con el mini-pimer hasta que quede homogénea.
13. Se desecha la parte espumosa usando la espátula hasta quedar lo más líquido posible.
14. Se lava el vaso de vidrio utilizado al principio.
15. Se coloca el contenido del vaso precipitado sin espuma en el vaso de vidrio recién lavado y secado usando un colador para separar los grumos.
16. Se desechan los grumos ya que usaremos solo la parte líquida.
17. Se llena ¼ del tubo de ensayo con el líquido que está en el vaso de vidrio utilizando un embudo.
18. Se lavan los utensilios que usamos.
19. Se completa hasta la mitad del tubo de ensayo con jugo de piña usando la bombilla.
20. Se tapa el tubo de ensayo con el dedo pulgar y se bate para que quede homogéneo. *Se fotografía la mezcla.
21. Con ayuda del embudo se agrega alcohol hasta que quede un centímetro entre la mezcla y el tope del tubo de ensayo. *La fibra del ADN empieza a subir.
22.  Con ayuda de una probeta se extrae la fibra de ADN que flota en el tubo de ensayo y se coloca en el portaobjeto.
23. Se pone una gota de alcohol encima de la fibra de ADN que está en el portaobjeto y se coloca encima el cubreobjeto.
24. Se coloca en el microscopio con un lente de 10 y se observa. *Se puede observar la heterocromatina en distintos grados de condensación.
25. Se lavan los utensilios utilizados.

PREGUNTAS

1. ¿Por qué se dice que el ADN es antiparalelo? Porque en la doble hélice del ADN, una hebra tiene las moléculas orientadas en sentido (5’->3’), mientras que la hebra complementaria está orientada en el otro sentido (3’->5’). Esto se refiere a la ubicación de los carbonos en el azúcar pentosa del ADN y quiere decir que el carbono 5’ de la pentosa está unido a un grupo fosfato, mientras que el carbono 3’ está unido al grupo hidroxilo (OH). Se organizan en el mismo sentido pero en diferente dirección. Es esta la configuración que se denomina antiparalela.

1. ¿Por qué se dice que el código genético es universal? Porque el código genético está constituido por una secuencia ordenada de cuatro letras (AT/CG), en las relaciones de las bases nitrogenadas purinas y pirimidina se establecen pares de bases nitrogenadas complementarias, es decir, una purina es el complemento exacto de una pirimidina. La información genética radica en las cuatro letras (Adenina-Timina-Citosina-Guanina) determinando el código genético del organismo.

1. ¿Cómo es posible diferenciar las bases nitrogenadas? Es posible diferenciar las bases nitrogenadas en dos categorías:

• Las bases púricas.

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Estas tienen la estructura fundamental del heterociclo purina. Las bases púricas que se encuentran en el ADN son la adenina y la guanina.

ADENINA:

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GUANINA:

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• Las bases pirimídicas.

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Estas derivan del anillo de pirimidina. Las bases pirimídicas que aparecen en el ADN son la timina y citosina.

TIMINA:

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CITOSINA

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1.  Explique los efectos de cada reactivo adicionado a la experiencia del laboratorio (Jugo de piña, detergente, alcohol y sal).

• Sal: se utiliza debido a que en disolución actúa disminuyendo la solubilidad de las proteínas, lo que hace que se separen de la membrana plasmática y posteriormente del ADN.
• Detergente: Por sus componentes anti grasas se utiliza como des componedor de las membranas celulares (plasmática y nuclear) las cuales están constituidas por proteínas (descompuestas por la sal), fosfolípidos y colesterol, en donde los dos últimos son degradados por el detergente, debido a que son lípidos.
• Alcohol: Se utiliza para separar el ADN de otros componentes celulares, sirviendo como aislante, es decir, coloca al ADN en el alcohol y a los demás componentes en el agua destilada.
• Jugo de piña: la piña y la mayor parte de los frutos tropicales, como la papaya, poseen una enzima llamada papaína, la cual es una proteína que degrada proteínas en péptidos, y luego en sus componentes fundamentales, los aminoácidos, esto lo logra a través de hidrolisis, en el caso de las células vegetales. Por lo cual degrada el resto de las proteínas restantes, y que están en el ADN, como las histonas.

1. ¿Cómo se logra la extracción de la molécula de ADN desde el nivel tejido vegetal hasta la obtención de la fibra de ADN?

Inicialmente al moler el plátano con el tenedor y la mini-pimer, se rompe los tejidos del plátano, dejando solo células por separado, y a su vez rompe también la pared celular de estas; luego al depositar el plátano en el vaso con agua destilada, detergente y sal, estos dos últimos degradan las membranas celulares (plasmática y nuclear) junto con las proteínas de estos. Una vez degradadas las membranas el alcohol se encarga de separar las moléculas de ADN con el resto de los componentes celulares, y finalmente el jugo de piña disuelve las proteínas histonas presentes en los ADN por lo cual se pueden encontrar moléculas de eucromatina y heterocromatina.

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