Principales Técnicas de Separación de Proteínas

Principales Técnicas de Separación de Proteínas

Una separación de proteínas es una serie de procesos que permiten aislar un sólo tipo de proteína de una mezcla compleja. La separación de proteínas es vital para la caracterización de la función, estructura en interacciones de la proteína de interés y existen distintas técnicas para la separación de proteínas. En el proceso de purificación se puede liberar a la proteína de la matriz que lo confina, separar las partes proteica y no proteica de la mezcla, y finalmente separar la proteína deseada de todas las demás.

Unas técnicas de separación serán presentadas en este ensayo. Estas técnicas son las más practicadas y utilizadas en la separación de proteínas.

Una de las técnicas es el método de separación basados en el tamaño molecular un ejemplo de este es la Cromatografía de filtración por gel. Esta técnica es el método de separación que se basa al tamaño de la proteína. Se utiliza un polímero insoluble hidratado. El hidrato usado se conoce como Sephadex y es una marca registrada de gel dextrano que se usa en laboratorio para la técnica de filtración en gel y cromatografía. Este tiene una estructura de bolitas porosas cuyos poros miden aproximadamente 0.1mm. Esta técnica se basa en el hecho de que las proteínas son de menor tamaño que el polímero y por esa razón pasan través del poro del polímero y se retrasan con respecto a las proteínas de mayor peso molecular que no pueden entrar en los poros. Los pasos para realizar esta técnica son los siguientes.

1. Se utilizan columnas donde se coloca (en este caso) el Sephadex.

2. Se coloca la muestra conteniendo las proteínas a separar.

3. Se abre la columna para que entre la muestra e inicie la separación.

4. Una vez finalizada la cromatografía se logra separar las proteínas de diferente tamaño.

La segunda técnica son los métodos de separación basados en la carga eléctrica un ejemplo de este es la Cromatografía de intercambio iónico. Esta técnica consiste en separar las proteínas en función de su carga eléctrica. Se usan polímeros como celulosa unidos a grupos cargados positivamente o negativamente. Para separar las proteínas con carga positiva se usa una columna de intercambio cargada negativamente. Un ejemplo seria la carboximetil celulosa. Y para separar proteínas con carga negativa se utilizan columnas como por ejemplo DEAE- celulosa que son cargadas negativamente.

La tercera técnica es el método de separación basado en la especificidad de ligandos un ejemplo es la Cromatografía de Afinidad. Esta técnica separa las proteínas en función a la unión con un ligado especifico (son uniones entre dos sustancias en forma específica), todo el tiempo en uniones tipo no covalente y reversible. Este tipo de cromatografía utiliza la ventaja de estas uniones específicas para la separación de una proteína

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