Prueba De La Catalasa

PRUEBA DE LA CATALASA:

Fundamento: la enzima catalasa se encuentra en la mayor parte de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo (exepto el streptococcus) generalmente las bacterias que carecen de citocromo también carecen de catalasa, lo que les impide descomponer el peróxido de hidrogeno. La catalasa descompone el peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno bajo la fórmula 2 H2O2-->2 H2O + O2. De esta manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del metabolismo aerobio de los azúcares.

Técnica: Se coloca una gota de H2O2 al 30% sobre un portaobjetos y luego se transfiere una porción de colonia sobre el H2O2 realizándose una emulsión. En lo posible debe tomarse la colonia a partir de un medio sin sangre ya que los eritrocitos tienen actividad de catalasa y pueden falsear los resultados. (Falso positivo)

Esta prueba también puede realizarse en un aislamiento en tubo, simplemente colocando unas gotas de H2O2 dentro del mismo.

Resultados:

Positivo: producción de burbujas (por liberación de oxigeno) Negativo: no se produce burbujas.

PRUEBA DE LA COAGULASA

Objetivo: Permite separar Staphilococcus aureus, que produce la enzima coagulasa, de las otras especies de estafilococos que se denominan coagulasa negativos.

Fundamento: Staphilococcus aureus posee dos tipos de coagulasa: Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que está unida a la pared celular. Esta actúa directamente sobre el fibrinógeno provocando la formación de coágulos cuando se mezcla una suspensión bacteriana con plasma citratado u oxalatado, la velocidad de coagulación es directamente proporcional a la concentración enzimática.

Técnica: varía según la coagulasa investigada.

Coagulasa ligada (en portaobjetos) en una gota de solución fisiológica emulcionar una suspensión de Staphilococcus y agregarle una gota de plasma saguineo mezclando suavemente.

Coagulasa ligada y libre: (en tubo) colocar volúmenes iguales de plasma sanguíneo y de cultivo de caldo de staphilococccus (o con el asa una buena cantidad de colonia pura) mezclar suavemente e incubar durante 4hs a 37ºC controlando cada 30min, si se produce la coagulación.

Resultados:

En portaobjetos:

Positivo: aglutinación entre 20.30 seg (cepa staph.aureus virulenta)

Dudoso: aglutinación e/20 seg a 1 min(cepa staph.aureus virulenta).

Negativo: suspensión homogénea.

En Tubo:

Positivo: coagulo total parcial cualquier grado de coagulación.

Negativo: suspensión homogénea (staphylococcus epidermidis u otro organismo).

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