Práctica N°1. Factores que influyen en las separaciones cromatográficas

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Práctica N°1. Factores que influyen en las separaciones cromatográficas.

OBJETIVO

Analizar la influencia de algunos factores que afectan las separaciones cromatográficas.

RESULTADOS

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DISCUSIÓN DE RESULTADOS.

Tanto para el colorante rojo de metilo como para sudan I, su Rf calculado disminuyo, conforme la proporción de hexano en el disolvente aumentaba y la de acetato de etilo disminuía, esto ya que, al ser moléculas polares, al aumentar el carácter no polar de la fase móvil, las interacciones con la FE (silica gel) crecieron, ocasionando un retardo en la elución. Entre ambos colorantes, el más polar es el rojo de metilo, como se confirmó al ser el componente más retenido.

En el experimento 2, se aplicó a la misma concentración de rojo de metilo a tres volúmenes diferentes, al ser el mismo analito, el valor de rf no vario, pero el ancho de la mancha fue mayor (0.1 mm) en la muestra más diluida, podría pensarse, que al haber una colocación adecuada de la muestra en la placa, las manchas no deberían variar de tamaño, pues tienen la misma cantidad de analito, pero al colocar mayor cantidad del disolvente en el que este está diluido, damos lugar al ensanchamiento de las manchas, el cual se observó en esta experiencia.

En el experimento 3, se observó asimetría (coleo) en las muestras con una mayor concentración de analito. Esto ocurre porque que el factor de partición aumenta conforme la FM eluye, ocasionando una cada vez más lenta velocidad de elución de la parte “trasera” de la mancha.

Para evidenciar el efecto de matriz en la cromatografía en capa fina, utilizamos rojo de metilo en diferentes disolventes (matrices), ambos tienen diferentes polaridades, por lo que el colorante tiene mayor solubilidad en el metanol que en el agua, pero ambos, menor que el acetato de etilo, por lo cual, se observan manchas con el mismo Rf, pero en diferente intensidad, en el mismo orden de solubilidad del rojo de metilo en estos disolventes.

También observamos la presencia de otros analitos en el seno de la muestra: cuando el rojo de metilo estaba acompañado de NaCl, observamos que la sal tiene interacción con la FE, pues ambos son compuestos polares, lo que provoca una mancha asimétrica, mientras que la sacarosa, al ser una molécula grande, impide que el colorante eluya como debe ser, provocando de igual manera, una asimetría.  

CONCLUSIONES

Al realizar una cromatografía en capa fina, existen diversos factores que pueden afectar el análisis. La polaridad de la fase móvil juega un papel muy importante, ya que de ella depende una correcta separación de analitos, también el volumen de muestra, pues mientras menor volumen apliquemos con la misma cantidad de analito, la probabilidad de que la muestra se ensanche será menor. Cuando se obtiene una mancha coleada, puede ser debido al exceso de analito presente en la muestra o en la interacción que tengan otros compuestos presentes en la dilución que puedan interactuar con la FM o FE o analito.

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