RECUENTO AEROBIOS MESÓFILOS

INSTRUCTIVO DE ANÁLISIS

RECUENTO AEROBIOS MESÓFILOS

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

ALCANCE

CAMPO DE APLICACIÓN

REFERENCIAS

Directiva 20.83-05 Productos Pesqueros de Exportación. Métodos Estandarizados de Análisis Microbiológico

RECUENTO DE GÉRMENES AEROBIOS MESÓFILOS VIABLES EN PLACA

A. PRELIMINARES

La determinación de los gérmenes aerobios mesófilos viables a través del método del recuento en placa, es utilizado para indicar la carga bacteriana de un producto.

Es de utilidad en productos fresco-enfriados, congelados, precocidos o alimentos preparados.

Principio base del método.

El método se basa en incubar en agar de recuento en placa, a 35ºC y durante 48 hrs., volúmenes medidos de diferentes diluciones de la muestra, y contar el número de colonias producidas para determinar el número de gérmenes viables o unidades formadoras de colonias por gramo de muestra.

B. PROCEDIMIENTO

Preparación de la muestra.

Asépticamente pesar 10 g. de muestra y diluír en 90 ml. de agua peptonada (A-23).

Homogenizar la mezcal por trituración en un vaso esterilizado de licuadora a una velocidad aproximada de 14.000 rpm y en un tiempo medio de 60-90 segundos.

Diluciones.

Según el número de gérmenes esperado y sobre la base de la solución inicial de 10 g. en 90 ml. (dilución 10-1), preparar diluciones decimales de 10-2, 10-3, 10-4, usando pipetas estériles para cada dilución, tomando 1 ml. de la solución anterior en 9 ml. de agua peptonada (fig. 1), evitando se forme espuma. Mezclar manualmente cada dilución agitándola 25 veces en 7 segundos con movimientos ascendentes y descendentes formando un ángulo de abertura aproximado de 60º entre brazo y antebrazo.

Técnica.

1. Asépticamente pipetear 1 ml. de cada dilución y sembrar por duplicado en placa Petri previamente identificada. Volver a mezclar la dilución a usar, si ésta ha permanecido más de 3 minutos sin agitar.

2. Agregar a cadA una de las placas 12-15 ml. de agar de recuento en placa (A-21) previamente fundido a baño maría y enfriado a 44-46ºC. No deberá transcurrir un tiempo mayor de 15 minutos entre la dilución de la muestra y la siembra en placas.

3. Inmediatamente mezclar la muestra diluida y el agar mediante agitación manual suave (movimientos circulares), durante un lapso igual o superior a un minuto, evitando mojar los bordes de la placa; dejar enfriar sobre una superficie plana y horizontal.

4. Una vez solidificado el agar, invertir las placas de Petri e incubar a 35ºC por 48 ± 2 hr.

5. Para realizar el contaje, se escogen las placas que presenten entre 30 y 300

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