REPORTE DE LA PRÁCTICA 4.- ESPECTROFOTOMETRÍA Y ELECTROFORESIS

UNIVERSIDAD

NACIONAL

AUTÓNOMA DE

MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN

LICENCIATURA EN QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA ESTRUCTURAL

Grupo: 2651

REPORTE DE LA PRÁCTICA 4.- ESPECTROFOTOMETRÍA Y ELECTROFORESIS.

EQUIPO

INTRODUCCIÓN

 La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados, y se basa en la relación que existe entre la absorción de luz por parte de un compuesto y su concentración. Cuando se hace incidir luz monocromática (de una sola longitud de onda) sobre un medio homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y otra transmitida, como consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea atenuada desde Po a P, siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la intensidad del rayo de luz transmitido. Dependiendo del compuesto y el tipo de absorción a medir, la muestra puede estar en fase líquida, sólida o gaseosa. En las regiones visibles y ultravioleta del espectro electromagnético, la muestra es generalmente disuelta para formar una solución

Uno de los métodos más utilizados para determinar la concentración de una muestra problema, es el método de la curva de calibración. Esta curva de calibración es una gráfica que relaciona la concentración de al menos cinco soluciones de estándar de concentraciones conocidas, con la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de onda máxima. Al hacer la curva de calibración, se debe emplear la longitud de onda de máxima absorbancia (λmax.), para obtener una recta con la máxima pendiente y así tener mayor sensibilidad y precisión al hacer las mediciones. La medición de la absorbancia de la solución problema debe hacerse a la misma longitud de onda que fue hecha la curva de calibración.

Por electroforesis se entiende el método basado en el movimiento de iones o moléculas cargadas por acción de un campo eléctrico. En la Bioquímica y Biología Molecular sirve para la separación e identificación de biomoléculas. La electroforesis se aplica en el campo de la Bioquímica a la separación de compuestos que poseen grupos ionizables (aminoácidos, péptidos, proteínas, ácidos nucleicos) teniendo en cuenta que la carga neta de estas sustancias depende del pH del medio en que se encuentren.

Como el parámetro que define la carga de una molécula de aminoácido es el punto isoeléctrico (pI), si se conocen o calculan los valores de pI para cada aminoácido que se va a ensayar, la carga que mostrarán al pH de la experimentación y la emigración que sufrirán por acción del campo eléctrico, es fácil determinarlas para cada uno de los aminoácidos. Cuando una molécula cargada se coloca en un campo eléctrico se moverá hacia uno u otro electrodo dependiendo de: 1) su carga eléctrica, 2) su tamaño, 3) la intensidad del campo eléctrico y 4) la temperatura del medio. Si la molécula tiene carga positiva migrará hacia el cátodo; si tiene carga negativa, hacia el ánodo.

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OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL :

Conocer las técnicas de espectrofotometría y electroforesis que nos permiten conocer la concentración de una sustancia e identificar biomoléculas respectivamente.

OBJETIVOS PARTICULARES:

• Determinar experimentalmente la longitud de onda de máxima absorbancia para una disolución de sulfato de cobre  
• medir la absorbancia de diferentes disoluciones de cobre para elaborar una curva patrón
• determinar la concentración de una muestra problema de sulfato de cobre empleando la curva patrón
• llevar a cabo una separación electroforética en papel de una muestra de diferentes aminoácidos

METODOLOGÍA

La indicada en el manual de Bioquímica, correspondiente a la practica 4, página, 48-49.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS

Resultados del barrido para determinar la longitud de onda de máxima absorbancia del sulfato de cobre a diferentes concentraciones

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