Reporte. Práctica 4 “Bacteriología en organismos (hemolinfa y hepatopáncreas) “

Universidad Autónoma de Sinaloa[pic 1][pic 2]

   Facultad de Ciencias del Mar

Microbiología

Biología Pesquera

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Reporte. Práctica 4 “Bacteriología en organismos (hemolinfa y hepatopáncreas) “

Equipo:

Daniel Enrique Castro Hernández

Naoki Abraham Kawamoto Camacho

Guadalupe de Jesús Lizárraga Valdez

Johana Nayaly Miramontes Camacho

Dulce Herminia Rendón Rendón

Melissa Sarabia Rojas

Joel Fernando Sánchez Valdez

Ángel Manuel Camacho peinado

Profra. Judith González Benítez

Mazatlán, Sin., a 05 de diciembre de 2018.

Introducción [pic 3][pic 4]

La bacteriología es un conjunto de métodos que se utiliza como apoyo en el diagnóstico de enfermedades en camarones, cuando se sospecha que la causa de la enfermedad está relacionada con presencia de bacterias patógenas en el agua de cultivo o dentro del organismo de los animales. Consiste en la siembra de muestras en diferentes medios de cultivo, para determinar si hay crecimiento o no de bacterias potencialmente patógenas (Vielka Morales Q. y Jorge Cuéllar-Anjel 2008).

En relación a las enfermedades bacterianas que afectan los cultivos de camarón, las infecciones ocasionadas por bacterias del género Vibrio son las más comunes, debido a que habitan de manera natural el ambiente marino y son consideradas patógenos oportunistas que pueden infectar al camarón en cualquiera de sus etapas de desarrollo (González, 2003). Ante esto, es necesario aplicar medidas de bioseguridad y un monitoreo constante para la detección de bacterias patógenas (Galaviz et al., 2007). 

Debido a la difícil situación que representa mantener un control sobre las enfermedades que afectan los cultivos de camarón, es que se plantea el uso de sistemas de producción cerrados, como una alternativa viable para el cultivo de camarón Litopenaeus vannamei. Estos sistemas proporcionan un ambiente mejor controlado para promover el crecimiento de los organismos acuáticos, mediante el monitoreo de parámetros que incluyen concentraciones de oxígeno disuelto (OD), nitrógeno amoniacal total (TAN), nitritos, dióxido de carbono 2 (CO2), temperatura, potencial de Hidrógeno (pH) y los niveles de alcalinidad en el sistema. Además, tienen un bajo impacto ambiental ya que se reutiliza el agua, previo tratamiento físico, químico y biológico. También, se emplea menos del 10 % del agua requerida en un sistema de producción convencional. Por esta razón, desde hace más de tres décadas, se han realizado investigaciones relacionadas con sistemas de cultivo cerrados o con recirculación de agua en la industria acuícola y aproximadamente una década en la producción intensiva de organismos (Timmons et al., 2002).

Objetivos

Determinar el crecimiento bacteriano en agar TCBS en organismos juveniles y adultos de camarón “hemolinfa y hepatopáncreas” así como la observación de los signos clínicos en dichos organismos.

Materiales y metodología[pic 5]

Materiales:[pic 6]

• Camarones vivos
• Cajas de Petri
• Jeringa para insulina
• Agar TCBS
• Tubos de ensayo
• Alcohol 96%
• Solución salina estéril
• Solución salina estéril al 2.5%
• Torundas de algodón[pic 7]
• Bascula gravimétrica
• Rastrillo
• Mechero de alcohol
• Pinzas
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Micropipeta
• Tijeras
• Navecilla para pesar

Metodología:

Bacteriología en organismos “hemolinfa”

• Tomar los organismos vivos y colocarlos en una bolsa estéril con agua.
• Transportar hacia el laboratorio de análisis a una temperatura alrededor de 24°C.
• Seleccionar los organismos vivos que presentan signos clínicos como: cutícula blanda, tracto digestivo vacío, coloración anormal en apéndices, letargia, nado errático, opacidad muscular, edema muscular, expansión de cromatóforos.
• Sacar el organismo con una red y eliminar exceso de agua con toalla de papel.
• Medir y pesar el organismo.
• Se limpia la cutícula del camarón con una torunda de algodón impregnada en alcohol al 96% con énfasis en la asepsia de las áreas cercanas al corazón o a los pereiópodos según el caso.
• Realizar la extracción de aproximadamente 50 μL de hemolinfa con una jeringa de insulina, alcanzando al corazón sin llegar al hepatopáncreas. También se puede extraer del seno ventral y base del 4to o 5to par de pereiópodos.
• La hemolinfa extraída es cuantificada y sembrada en una placa de agar TCBS (dispersar con el rastrillo) dejar una gota para portaobjetos.
• Observar el tiempo de coagulación no debe ser mayor a un minuto.
• Incubar la placa de agar TCBS con la hemolinfa extraída y dispersada con el rastrillo a una temperatura a 30°C por 18 a 24 horas.

Bacteriología en organismos “hepatopáncreas”

• Tomar los organismos vivos.
• Colocar a los organismos en una bolsa estéril con agua del estanque.
• Transportarla hacia el laboratorio de análisis a 24°C.
• Medir y pesar de manera individual los organismos vivos.
• Limpiar el camarón con una torunda con etanol al 96%.
• Realizar una disección.
• Extraer el hepatopáncreas.
• Pesar y colocar el hepatopáncreas en un tubo con 10 ml de solución salina estéril al 2.5%.
• Macerar y extraer 1ml de hepatopáncreas para transferirlo a un tubo con 9ml de solución salina estéril.
• Homogeneizar bien los inóculos y sembrar ambas muestras en diferentes cajas de Petri.
• Colocar 100ml de cada muestra en agar TCBS.
• Incubar ambas placas a 30°C durante un periodo de 18 a 24h.
• Pasado el tiempo de incubación se procede a realizar el conteo de colonias para establecer las unidades formadoras de colonias por gramo.

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