Reacción de la catalasa y de la deshidrogenasa láctica

PRACTICA 1 (PRACICAS DE BIOQUIMICA II GARCILASO-VEJAR RIVERA)

REACCION DE LA CATALASA Y DE LA DESHIDROGENASA LACTICA

OBJETIVO

En esta sesión de laboratorio se determinara cualitativamente la actividad enzimática y de la deshidrogenasa láctica.

MATERIAL

1 gradilla

1vaso de precipitados de 500 ml

1 vaso de precipitados de 250 ml

4 pipetas de 5 ml

9 tubos de ensaye de 15x150mm

1 pinza para tubos de ensaye

1 mechero, tripie y tela de asbesto

REACTIVOS

Peroxido de hidrogeno al 3%

Cianuro de sodio al 5% (100 ml)

Nitrato de plomo al 5% (100ml)

Azul de metileno al 0.02% (300 ml)

Lactato de sodio al 5% (no hay)

Suspensión de levaduras al 20%

Aceite mineral        

REACCION DE LA CATALASA

PROCEDIMIENTO

1.-Prepare un baño de agua hirviendo utilizando se vaso de precipitados de 500 ml. Use solamente agua destilada y llene el vaso hasta la mitad.

2.-Coloque en una gradilla 4 tubos de ensaye y numérelos para su identificación.

3.-Adicione peróxido de hidrogeno al 3%  a cada uno de los 4 tubos.

4.-Agregue 5 gotas de cianuro de sodio al 5 % al tubo 3.

5.-Agregue 5 gotas de nitrato de plomo al 5% al tubo 4.

6.-En un tubo de ensaye aparte, coloque 3 ml de sangre diluida 1:50 y caliéntela en el baño de agua hirviendo por 5 minutos, agregue el contenido al tubo 2.

7.-Añada  3ml de sangre diluida a los tubos 1,3 y 4.

8.-Controle su baño de agua a 37oC.

9.-Suave, pero rápidamente, agite los tubos y llévelos al baño de agua a 37oC. La reacción de la catalasa es sumamente rápida, así que no hay que perder de vista ni un momento los tubos sobre todo el número 1 donde está la reacción normal sin inhibir.

10.-Deje todos los tubos en el baño de agua a 37oC por 5  minutos.

11.-Haga sus observaciones y anote sus resultados.

ACTIVIDAD DE LA DESHIDROGENASA LACTICA

1.-Coloque en la gradilla tres tubos de ensaye y numérelos.

2.-Agregue 5 ml de azul de metileno al 0.02% a cada uno de los tres tubos.

3.-Agregue 10 gotas de lactato de sodio al 5% a los tubos 1 y 2.

4.-En un tubo de ensaye aparte, coloque 5 ml de suspensión de levadura al 20% y caliéntela en un baño de agua hirviendo por 5 minutos vacié el contenido al tubo 2.

5.-Agregue 5 ml de suspensión de levadura, sin calentar, a los tubos 1 y 3.

6.-Mezcle bien y, si es posible, cubra los tubos con una capa, no mayor de dos milímetros, de aceite mineral. Al hacerlo, incline los tubos para que el aceite resbale lentamente por la pared del tubo.

7.-Coloque los tubos en un baño de agua a 370C y observe el resultado a los 3,6,9,12 y 15 minutos.

8.-Haga sus observaciones y anote sus resultados.

FUNDAMENTOS DE LAS REACCIONES

1.-REACCION CATALIZADA POR LA CATALASA

2.-REACCION CATALIZADA POR LA DESHIDROGENASA LACTICA

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