Reactivos

2. Reactivos

a) Preparar una solución de ácido oxálico al 0.4 % pesar 4gr. De este ácido y llevar a volumen de 1000 ml. Con agua destilada.

b) Soluciones estándar (madre) de ácido ascórbico: Preparar una solución de 0.1 % de ácido ascórbico en una solución ácida de 0.4 % de ácido oxálico. Pesar 100 mg. de ácido ascórbico y llevar a volumen de 100 ml. con una solución de ácido Oxálico al 0.4 %.

c) Estándares de trabajo (ET): Tomar 1, 2, 3, 4 y 5 ml. de la solución madre de ácido ascórbico y llevar a volumen de 100 ml. con una solución de ácido oxálico al 0.4 %. Esta solución numeradas del 1 al 5 contendrán 1, 2, 3, 4 y 5 mg. de ácido ascórbico por 100 ml. respectivamente.

d) Solución coloreada (Colorantes): pesar 12 mg. de 2 – 6 DFIF , disolver y llevar a 1000 ml. de volumen con agua destilada. Utilizar agua destilada hirviente. Almacenar en botella de color oscura y en refrigeración.

3. Preparación de la Curva Estándar.

a) Tomar 4 tubos de prueba y enumerarlas de I al IV y agregar lo siguiente:

I 10 ml. de agua destilada

II 1 ml. de ácido oxálico al 0.4%

III 1 ml. de estándar de trabajo (ET) Nº 1 + 9 ml. de agua

IV 1 ml. del estándar de trabajo (ET) Nº 1

b) Ajustar a cero la Absorbancia usando I y el filtro seleccionado.

c) Al tubo II añadir 9 ml. del colorante y exactamente después de 15 segundos, leer la absorbancia.

d) Ajustar a cero la absorbancia con la solución del tubo III

e) Al tubo IV añadir 9 ml. del colorante y exactamente después de 15 segundos, leer la absorbancia (L2).

Repetir el paso 3

a) Para cada estándar de trabajo (ET) y registrar los correspondientes valores de L1 y L2. Construir la curva estándar con las concentraciones de ácido ascórbico (mg / 100 ml) en la abscisa y la ordenada la absorbancia, (L1 - L2) para cada estándar de trabajo.

4. Método: Preparación de la Muestra.

a) Marcar 50 gr. De muestra fresca con 350 ml. de una solución de ácido oxálico al 0.4 % en una licuadora por 3 min. y luego filtrar.

b) Determinar L1 como se describió anteriormente (paso 3)

c) En el tubo III colocar 1 ml. de filtrado (muestra) mas 9 ml de agua ajustar al cero la absorbancia.

d) Luego en el tubo IV colocar 1 ml. de filtrado (muestra) mas 9 ml de colorante y registrar la absorbancia L2 después de 15 segundos.

e) Calcular (L1 - L2) y obtener la concentración de ácido ascórbico a partir de la curva estándar

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