SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA DE AZUL DE METILENO Y FLUORESCEINA USANDO CROMATOGRAFÍA POR ADSORCIÓN

SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA DE AZUL DE METILENO Y FLUORESCEINA USANDO CROMATOGRAFÍA POR ADSORCIÓN

INTRODUCCIÓN

El fenómeno de adsorción es la base de la separación en las cromatografías gas-sólido (CGS) y lÍquido-sólido (CLS). En la cromatografía líquido-sólido, la adsorción puede ser bastante específica, de modo que, de una mezcla, un soluto puede ser adsorbido selectivamente. La separación de componentes de una mezcla por esta técnica depende de la diferencia en el grado de adsorción de los solutos en la fase estacionaria (adsorbente) y de su solubilidad en el disolvente empleado para la elución (fase móvil.) Estas interacciones dependen de tres factores:

a) La estructura molecular de los componentes involucrados en el proceso cromatográfico.

b) La competencia entre los solutos de la mezcla a separar por los sitios activos o de adsorción- de la superficie de la fase estacionaria y

c) La afinidad de los mismos por la fase móvil. La CLS puede tener como soporte una columna o una placa de vidrio.

OBJETIVOS:

 Aplicar la técnica de cromatografía por adsorción para la separación de dos colorantes.

 Comprobará la separación con base en el perfil de elución para señalar las ventajas y desventajas del método.

MATERIAL Y APARATOS

1. Columna de cromatografía (15 X 2 cm)

2. Una pipeta de 1 ml (graduada en centésimas)

3. Una pipeta de 10 ml (graduada en décimas)

4. Una gradilla metálica

5. Treinta tubos de ensaye de 13 X 100 mm

6. Lana de vidrio

7. Tubería de látex

8. Dos vasos de precipitados de 100 ml

9. Soporte universal

10. Pinzas para bureta

11. Bulbo de hule

12. Embudo de vidrio

13. Pipeta Pasteur

14. Espectofotómetro para la región visible

15. Cubetas para el espectrofotómetro

16. Ponteciómetro

PROCEDIMIENTO

Llenar con agua destilada aproximadamente tres cuartas partes de la columna de vidrio, introducir un disco de lana de vidrio previamente humedecido para formar un soporte en la base de la columna. Pesar 15 g de alúmina alcalina y adicionarlos a la columna usando un embudo de vidrio, la llave de la columna debe de estar abierta para que se desaloje el agua necesaria, la columna de alúmina no debe secarse durante la separación. La adición se hace lenta, pero constante, para que el adsorbente se empaque de manera homogénea y no se formen estratos, ni burbujas de aire.

Una vez sedimentada la alúmina, se ajusta la velocidad de elución, que deberá ser entre 15 y 20 gotas por minuto. Cuando el menisco del agua está 3 mm por encima de la columna de alúmina, aplicar 0.1 ml de la mezcla de colorantes en la parte central de la superficie del adsorbente (tener cuidado de no impregnar las paredes de la columna con la muestra), en este momento

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