SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA DE AZUL DE METILENO Y FLUORESCEÍNA USANDO CROMATOGRAFÍA POR ADSORCIÓN

RESULTADOS

Tabla 1. Valores de absorbancia obtenidos para la separación de fluoresceína y azul de metileno

Tubo no. Volumen de elución (mL) A493 A668 Observaciones

1 3 0.008 0.001 Transparente

2 6 0.002 0.030 Azul tenue

3 9 0.039 0.495 Azul

4 12 0.020 0.214 Azul

5 15 0.005 0.092 Azul

6 18 0.003 0.042 Azul

7 21 0.001 0.031 Azul

8 24 0.000 0.020 Azul tenue

9 27 0.001 0.014 Transparente

10 30 0.003 0.010 Transparente

11 33 0.002 0.008 Transparente

12 36 0.003 0.007 Transparente

13 39 0.001 0.006 Transparente

14 42 0.003 0.003 Transparente

15 45 0.002 0.002 Amarillo tenue

16 48 0.043 0.002 Amarillo

17 51 0.746 0.007 Amarillo

18 54 0.157 0.008 Amarillo

19 57 0.043 0.011 Transparente

20 60 0.022 0.008 Transparente

21 63 0.021 0.008 Transparente

22 66 0.021 0.008 Transparente

23 69 0.015 0.007 Transparente

24 72 0.016 0.018 Transparente

25 75 0.012 0.008 Transparente

*Los valores de A (493 nm) no son los obtenidos experimentalmente ya que se obtuvieron algunos valores negativos. Se realizó un ajuste matemático adicionando 0.006 a cada dato obtenido por lo tanto la absorbancia más negativa de -0.006 ahora es 0.000

DISCUSIÓN

En ésta práctica se llevó a cabo la separación de una muestra de azul de metileno y fluoresceína. En el perfil de elución se puede observar en el tubo 3 (volumen 9 mL) el primer pico de absorción en el a 668 nm y un pequeño pico en la curva a 493 nm, de acuerdo a la bibliografía el azul de metileno tiene una absorción máxima a 661 nm pero también absorbe un poco a 493 nm por lo que podemos comprobar que se obtuvo primero este componente. Observamos un segundo pico en el tubo 17 (volumen 51 mL) a 493 nm que coincide con la máxima absorción de la fluoresceína. Según la bibliografía la fluoresceína tiene una absorción máxima a 493.4 y 460 nm. Así mismo en los tubos 3 y 17 se observó una coloración azul y amarilla respectivamente.

En el perfil de elución las dos curvas no se intersectan por lo que podemos decir que la separación se realizó adecuadamente.

El sistema cromatográfico que se utilizó para esta separación consta de un soporte formado por la columna cromatográfica, una llave reguladora, una llave de cerrar, y un disco de lana de vidrio. Dos fases móviles: agua (etapa 1) y regulador de fosfatos (etapa 2), una fase estacionaria de Alúmina ácida (óxido de aluminio) pH 5 y los solutos a separar: azul de metileno y fluoresceína.

Para describir los resultados experimentales es necesario conocer las propiedades de las sustancias que intervienen en el proceso de separación:

La alúmina u óxido de aluminio (reactivo de Brockmann) es un adsorbente ligeramente básico debido a que en el proceso de extracción de la alúmina a partir de la bauxita quedan algunas moléculas de hidróxido de aluminio adheridas a la alúmina, dándole a ésta un carácter básico. Es un compuesto polar por lo que retiene mejor componentes polares.

El azul de metileno es un compuesto solido con forma de cristales o polvo cristalino y de color verde oscuro, con brillo bronceado. Es inodoro y estable al aire. Es fácilmente soluble en el agua y en cloroformo, y moderadamente soluble en alcohol. Su solubilidad es de 40 g/l en agua a 20°C

La fluoresceína es una xantina, dibásica, luminiscente, soluble en agua. Es un sólido amorfo amarillo o cristales naranjas-rojizos. Exhibe un color verde fluorescente a un pH mayor de 6. Su solubilidad en agua es de 500g/l a 20°C.

Los

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