Separación de una mezcla de azul de metileno y fluoresceína.
Enviado por jessyaguilar11 • 12 de Octubre de 2015 • Práctica o problema • 1.210 Palabras (5 Páginas) • 1.138 Visitas
[pic 1] INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL[pic 2]
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Carrera: Químico Bacteriólogo Parasitólogo
Lab. de Métodos de análisis
Práctica: Separación de una mezcla de azul de metileno y fluoresceína usando cromatografía por adsorción.
Alumna:
- Aguilar Meza Jessica Mariel
Sección: 2
Grupo: 5QM1
Profesor:
- Fernández López Francisco
29 de Septiembre del 2015
FUNDAMENTOS
La cromatografía por adsorción es una de las técnicas más empleadas para la separación de mezclas en sus componentes puros, purificación de un compuesto y comparación de compuestos que se creen idénticos, entre otros usos.
El fundamento de la cromatografía consiste en el reparto o distribución diferencial de dos o más compuestos (solutos) entre dos fases, una de las cuales permanece fija, por lo que se denomina fase fija o estacionaria y otra que fluye a través de ella, por lo que se le denomina fase móvil o eluyente. Como la fase estacionaria debe permanecer fija, su estado físico se limita a sólidos y líquidos, en tanto que la fase móvil requiere ser un líquido o un gas para poder fluir.
Se basa en el diferente grado de adsorción de cada compuesto sobre la superficie del adsorbente de modo que el compuesto a separar se ve atraído a las zonas afines por fuerzas electrostáticas, ésta interacción triple de soluto, disolvente y adsorbente establece las proporciones relativas en que se fijan y migran a través del adsorbente quedando reversiblemente unido a la molécula, hasta que algún factor externo cambie su afinidad.
Esta interacción además depende de factores como: la estructura molecular de los componentes a separar, la competencia entre los solutos de la mezcla por los sitios de adsorción de la fase estacionaria y la afinidad de los componentes por la fase móvil.
Existen diferentes modalidades de cromatografía por adsorción: Cromatografía de columna, Cromatografía de capa fina (TLC), Cromatografía de gases (GC), Cromatografía de líquidos (LC), Cromatografía de líquidos de alta eficacia (HPLC).
OBJETIVOS
- Emplear la cromatografía por adsorción para separar una mezcla de dos colorantes.
- Con ayuda del perfil de elución comprobar si hubo una separación de los colorantes.
RESULTADOS
Volumen de elución (mL) | Absorbancia a 493 (nm) | Absorbancia a 668 (nm) |
3 | 0.002 | 0.001 |
6 | 0.086 | 1.824 |
9 | 0.035 | 0.986 |
12 | 0.004 | 0.118 |
15 | 0.002 | 0.052 |
18 | 0.001 | 0.027 |
21 | 0.001 | 0.025 |
24 | 0.001 | 0.022 |
27 | 0.002 | 0.107 |
30 | 0.001 | 0.010 |
33 | 0.001 | 0.015 |
36 | 0.002 | 0.010 |
39 | 0.001 | 0.004 |
42 | 0.001 | 0.004 |
45 | 0.002 | 0.003 |
48 | 0.003 | 0.002 |
51 | 1.803 | 0.005 |
54 | 1.083 | 0.010 |
57 | 0.198 | 0.007 |
60 | 0.057 | 0.005 |
63 | 0.039 | 0.005 |
66 | 0.031 | 0.010 |
69 | 0.026 | 0.007 |
72 | 0.024 | 0.007 |
75 | 0.019 | 0.002 |
Tabla 1. Valores de absorbancia obtenidos para la separación de fluoresceína y azul de metileno.
DISCUSIONES
Se utilizaron dos fases móviles, el agua y el fosfato de potasio dibásico, los componentes se distribuyen entre dos fases a través de la combinación de los procesos de adsorción y desorción. Para la separación por adsorción se utilizó de soporte una columna de vidrio con una salida que nos permitía colectar por goteo.
La primer fase móvil utilizada fue el fosfato de potasio dibásico por que el primer colorante que se separó fue el azul de metileno que es más afín al fosfato de potasio dibásico que la fluoresceina. Es por eso que se separa de la columna de alúmina. En la adsorción física, las moléculas del gas se mantienen unidas a la superficie del sólido por medio de las fuerzas de Van der Walls relativamente débiles.
El perfil de elución se graficó a partir de los datos de la tabla 1 y el resultado se observa en la figura 1. Dicho perfil se elaboró para comprobar la separación de la mezcla. La elución resulto casi como la esperábamos, ya que si observamos la figura 1, podemos ver dos picos en el espectro de absorción y un considerable espacio entre ellos, los cuales corresponden a la máxima elución de los colorantes involucrados. La separación entre ambas curvas nos indica una separación efectiva. Si las curvas hubieran estado sobrepuestas no hubiéramos obtenido una separación como tal. Esto se podía observar también en los tubos ya que el azul de metileno dejó de observarse a los 10 tubos y después de 6 tubos comenzamos a ver a la fluoresceina, aunque esta no sería una forma objetiva de determinar una separación efectiva ya que la percepción visual de cada uno de nosotros es distinta, por lo que fue necesario realizar las determinaciones de las absorbancias.
La presencia de varios picos en una curva nos puede indicar que afectó la separación de la mezcla por el cambio de velocidad del eluyente. En nuestro caso se observa un ligero pico cerca de los 27mL. Posiblemente fue al momento de corregir la velocidad de las gotas.
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