SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA DE PIGMENTOS, PRESENTES EN HOJAS DE ESPINACA.

SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA DE PIGMENTOS, PRESENTES EN HOJAS DE ESPINACA

Karla Maryoly Bermúdez pino1*, Sandra Tatiana Ramírez Pino1

RESUMEN

La práctica de laboratorio se realizó en el laboratorio de química de la Universidad de la Amazonia el día 17 de abril de 2017, en esta se identificaron algunos de los pigmentos que se presentan en la espinaca (muestra vegetal en seco) por el método de cromatografía en columna. Los pigmentos se separaron gracias a la silicagel que nos sirvió como fase estacionaria y el metanol como fase en movimiento. Al realizar este proceso como la preparación de la muestra vegetal, el montaje de la columna, la inmersión de la muestra vegetal en la columna se separaron dos pigmentos uno verde oscuro y otro verde un poco más claro debido a que no se obtuvo un tiempo suficiente para seguir separando los pigmentos, aunque en la columna se podía observar que se estaban separando otros pigmentos de la muestra vegetal (amarillo y naranja muy claro). En conclusión podemos decir que los pigmentos que se pudieron y no separar de la muestra vegetal fue responsabilidad del eluyente (fase en movimiento) y del tiempo ya que estos dos factores fueron los que más tuvieron juego en la separación de los pigmentos.

Palabras claves: fase estacionaria, pigmentos, cromatografía, eluyente.

INTRODUCCION

La clorofila es un pigmento de las plantas, que les proporciona su color verde y que absorbe la luz necesaria para la fotosíntesis. La clorofila absorbe principalmente luz violeta roja y azul y refleja luz verde. La abundancia de clorofila en hojas y su ocasional presencia en otros tejidos vegetales es la causa de que esas partes de las plantas aparezcan verdes, pero en algunas hojas la clorofila es enmascarada por otros pigmentos. La extracción y reconocimiento de estos pigmentos es interesante para el estudio y conocimiento de sus propiedades. (Blanco Prieto F.1983.)

Los Pigmentos vegetales, que se encuentran en los cloroplastos, son moléculas químicas que reflejan o transmiten la luz visible, o hacen ambas cosas a la vez. El color de un pigmento depende de la absorción selectiva de ciertas longitudes de onda de la luz y de la reflexión de otras. Constituyen el sustrato fisicoquímico donde se asienta el proceso fotosintético. Hay diversas clases de pigmentos:

Principales:

• Clorofilas (a, b, c, d y bacterioclorofilas) de coloración verde.

Accesorios:

• Carotenoides (carotenos y xantofilas) de coloración amarilla y roja.

• Ficobilinas de coloración azul y roja presentes en las algas verdeazuladas, que comprenden el filo de los Cianofitos. (García JL. 1980)

La Clorofila, es el pigmento que da el color verde a los vegetales y que se encarga de absorber la luz necesaria para realizar la

1Universidad de la Amazonia – Ingeniería Agroecológica *k.bermudez@udla.edu.co

fotosíntesis, proceso que posibilita la síntesis de sustancias orgánicas a partir de las inorgánicas (CO2, H2O y sales minerales), mediante la transformación de la energía luminosa en energía química. La clorofila absorbe sobre todo la luz roja, violeta y azul, y refleja la verde. Generalmente la abundancia de clorofila en las hojas y su presencia ocasional en otros tejidos vegetales, como los tallos, tiñen de verde estas partes de las plantas. En ocasiones, la presencia de clorofila no es tan patente al descomponerse y ocupar su lugar otros pigmentos de origen isoprénico también presentes en los plastos como son los carotenos (alfa, beta y gamma) y las Xantofilas. Las algas verdeazuladas contienen la misma clase de clorofila que las plantas superiores, pero la ausencia de cloroplastos hace que se distribuya por toda la célula. Con frecuencia otros pigmentos como la ficobilina (presente también en los rodófitos) enmascaran la clorofila y confieren a estas a las células, un color azulado o rojizo. Su función es captar la luz y transferirla a la clorofila. Las clorofilas presentan una estructura molecular de gran tamaño de tipo porfirinico, estando formada en su mayor parte por carbono e hidrógeno; constituyendo un anillo tetrapirrolico ocupado en el centro por un único átomo de magnesio, rodeado por un grupo de átomos que contienen nitrógeno. Del anillo parte una larga cadena de 20 átomos de carbono, denominada fitol que constituye el punto de anclaje de la molécula de clorofila a la membrana interna del cloroplasto, el orgánulo celular donde tiene lugar la fotosíntesis. Cuando la molécula de clorofila absorbe un fotón, sus electrones se excitan elevándose a un nivel de energía superior. Esto es el punto de partida en el cloroplasto de una secuencia compleja de reacciones químicas que dan lugar al almacenamiento de energía en forma de enlaces químicos. Los diversos tipos de clorofilas existentes, se diferencian en pequeños detalles de su estructura molecular y que absorben longitudes de onda luminosas algo distintas. (Gutiérrez R. et all. 1990.)

Por cromatografía se pueden separar cuatro clorofilas distintas:

• La clorofila A constituye de manera aproximada el 75% de toda la clorofila de las plantas verdes, estando presente también en las algas verdeazuladas y en células fotosintéticas más complejas. • La clorofila B es un pigmento accesorio presente en vegetales y otras células fotosintéticas complejas; absorbe luz de una longitud de onda diferente y transfiere la energía a la clorofila A, que se encarga de transformarla en energía química.

• Las clorofilas C y la D son propias de algas y bacterias. Las clorofilas actúan como catalizadores, es decir, como sustancias que aceleran o facilitan las reacciones químicas, pero que no se agotan en las mismas. Entre los carotenoides hay también muchos catalizadores e intervienen como pigmentos accesorios en la fotosíntesis, transfieren a la clorofila la energía de la luz que absorben para su conversión en energía química. (Villarreal F. et all. 1981.)

PIGMENTOS VEGETALES

Los colores que presentan los vegetales son debidos a unos compuestos químicos llamados pigmentos. El color que presenta un determinado órgano vegetal depende generalmente del predominio de uno u otro pigmento o la combinación de ellos. Además, algunos de los pigmentos que condicionan el color están estrechamente ligados a las actividades fisiológicas del propio vegetal. El color verde en los vegetales es debido a la presencia de dos pigmentos estrechamente emparentados llamados clorofila a y clorofila b. Se encuentran prácticamente en todas las plantas con semilla, helechos, musgos y algas. También aunque aparentemente falten en algunas hojas de color rojo o amarillo, cuando se extraen las otras sustancias colorantes de estas, puede comprobarse incluso allí la presencia

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