Susceptibilidad a los Antibióticos

Susceptibilidad a los Antibióticos

El control de los microorganismos es crucial para la prevención y tratamiento de enfermedades. Los antibióticos pueden ser sintetizados por microorganismos o fabricados por procedimientos químicos. Ejemplos de antibióticos naturales son la penicilina, estreptomicina, tetraciclina, y de sintéticos son las sulfamidas, cloranfenicol, ciprofloxacino. El éxito de un quimioterápico depende de su toxicidad selectiva: debe matar al patógeno, causando el menor daño posible en el paciente. Debido a que los efectos secundarios de un antibiótico pueden ser serios, es necesario administrar las dosis cuidadosamente. Para un tratamiento correcto es necesario determinar la eficacia antimicrobiana frente al patógeno. Ensayos específicos pueden mostrar que antibi6ticos son más eficaces en contra de un microorganismo y dar una estimación de la dosis terapéutica adecuada.

La concentración inhibitoria mínima (CIM) proporciona una idea de la eficacia de un agente quimioterapéutico, y es la concentraci6n más baja que inhibe el crecimiento de un microorganismo. Cuando se está estudiando un patógeno aerobio o facultativo de crecimiento rápido se puede aplicar la técnica de difusión en agar para ahorrar tiempo y medios de cultivo, y el método de Bauer y Kirby  es uno de los más empleados. Algunas bacterias producen bacteriocinas, proteínas con propiedades antibióticas sobre otros miembros de la misma especie bacteriana o familias relacionadas. Su rango en peso molecular es de entre 2 kDa hasta 80 kDa y sus variados mecanismos de acción incluyen desde inhibición de la replicación del DNA hasta la despolarización de la membrana citoplasmática. Esta propiedad de secretar bacteriocinas le otorga a la célula productora una gran ventaja biológica al competir por un nicho en un ambiente densamente poblado, como es el caso del  intestino de los mamíferos.

1. OBJETIVOS

1.   Conocer métodos para evaluar la susceptibilidad de los microorganismos a los antibióticos

2.  Determinar la concentración inhibitoria mínima (CIM) de algunos antibióticos aplicados a ciertas bacterias.

3.  Determinar la susceptibilidad a los antibióticos a través del método de difusión en agar descrito por Kirby y Bauer.

III.        ACTIVIDADES

1. Determinación de la concentración inhibitoria mínima (CIM):

• Prepare una suspensión bacteriana con una densidad similar al tubo 0.5 del nefelometro

• Realice la diluci6n del antibiótico en caldo Mueller Hinton (MH) Tomar 1 ml de la soluci6n que se encuentra a una concentraci6n de 200 ug/ml y deposítelo en el primer tubo con caldo MH, mezcle bien y luego toma 1 ml de este tubo y los mezcla con el segundo tubo y así sucesivamente hasta llegar al tubo número siete. El tubo número 8 no lleva antibiótico (control de la cepa).
• Colocar dos gotas de la suspensión previamente ajustada a cada uno de los 8 tubos, e incubar a 37ºC por 24 horas.
• Determine la concentración inhibitoria mínima.

1. Método de Kirby-Bauer (difusión en agar) :

• Preparar suspensión bacteriana con densidad equivalente al tubo 0.5 del nefel6metro
• Introduzca una tórula estéril en la suspensión bacteriana y deje que se impregne con la suspensión.
• Pase la t6rula por toda la superficie de una placa de MH
• Utilizando una pinza, coloque sensidiscos sobre la superficie del agar, presionando suavemente. Incubar por 24 boras a 37ºC.
• Observe los halos de inhibición alrededor de los sensidiscos. Posteriormente mida el diámetro de cada halo.
• Compare el diámetro obtenido para cada antibiótico con la tabla que estará a su disposición en el laboratorio. Esto permitirá definir si su cepa es sensible o resistente al antibiótico evaluado.

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