TEMA: PRUEBAS DE ESTERILIZACIÓN

UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO[pic 1][pic 2]

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS

CARRERA DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA

Laboratorio de Microbiología I

TEMA: PRUEBAS DE ESTERILIZACIÓN

1. INTRODUCCIÓN

La esterilización es un método de eliminación total de todo tipo de organismo y que asegura la ausencia absoluta de cualquier forma viviente, mientras que la desinfección es un proceso que solamente elimina formas vegetativas de los organismos.

La esterilización con vapor seco y húmedo son los procedimientos de mayor utilización en microbiología. El calor seco desnaturaliza las enzimas y destruye a los microorganismos por oxidación. Estos métodos se aplican principalmente en la esterilización de asas de inoculación y material de vidrio.

Los procesos de calor húmedo se aplican para esterilizar medios de cultivo, soluciones y cultivos bacterianos que se desechan, el más recomendable es el autoclave en el que se utiliza vapor de agua a presión para alcanzar una temperatura de 121°C el material se deja a esta temperatura por 15 minutos para asegurar la destrucción de endosporas (estructuras bacterianas más resistentes al calor).

Cuando se requiere esterilizar materiales sensibles al calor  como las soluciones de vitaminas, aminoácidos, etc., se esteriliza por filtración en membranas estériles de 0,2 micras de diámetro. Las superficies generalmente se desinfectan con radiaciones UV o compuestos químicos como fenoles, formaldehídos, alcoholes y deteregentes.

1. OBJETIVO

• Comparar métodos más eficientes para la asegurar la esterilidad de un medio de cultivo

1. MATERIALES

• Agar nutritivo
• Agar VGBR
• Autoclave
• Estufa
• Tubos bacteriológicos
• Baño María
• Pipetas de 10ml
• Incubadora
• Asa
• Mechero
• Cinta masking
• Papel kraft o periódico
• Marcador para CD

1. PROCEDIMIENTO

1. Preparación del medio de cultivo y pruebas de esterilización

• Preparar los medios de cultivo según las especificaciones (considerando que en cada tubo irá un volumen aproximado de 10ml).
• Para probar esterilidad de los medios, preparar 10 tubos de ensayo con medios de cultivo (10ml en cada tubo) y realice lo siguiente:

• 2 tubos en el autoclave a 121ºC por 15 minutos.
• 2 tubos de ensayo en vapor fluyente por 15 minutos.
• 2 tubos en baño María con agua hirviente por 15 minutos.
• 2 tubos sometidos a radiación UV.
• 2 tubos se los deja como testigos.
• Incubar todos por 48h a 37ºC.

1. RESULTADOS

• Presente las diferencias en cuanto a esterilidad en los tubos de acuerdo al método de esterilización.
• Explicar los resultados obtenidos en los diferentes tipos de esterilización de los medios de cultivo utilizados (agar nutrivo y agar VGBR)
• Discutir los métodos más adecuados para la esterilización de medios de cultivo, soluciones y material de vidrio de acuerdo a la bibliografía.

1. CUESTIONARIO

• Definir:

Esterilización, asepsia, sanitización y desinfección.

• Indique el fundamento de esterilización por calor seco y por calor húmedo. ¿Cómo actúa cada uno de estos métodos de esterilización sobre los microorganismos para destruirlos?
• Indique paso a paso el funcionamiento del autoclave.

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