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TRABAJO PRÁCTICO N°6. MEDIDAS DE CRECIMIENTO MICROBIANO


Enviado por   •  21 de Octubre de 2017  •  Informe  •  1.110 Palabras (5 Páginas)  •  339 Visitas

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TRABAJO PRÁCTICO N°6

 

 

MEDIDAS DE CRECIMIENTO MICROBIANO

TURBIDIMETRÍA

ESCALA DE MACFARLAND

 

 

MICROBIOLOGÍA GENEREAL  

2017

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ROMINA DÍAZ

TECNÓLOGO QUÍMICO  

 

INTRODUCCIÓN TEÓRICA

Los métodos empleados para contar microorganismos se dividen en dos grandes grupos: métodos de recuento directo o cuantitativos, que permiten contar directamente el número de células, y métodos indirectos o cualitativos, que relacionan algún factor con el número de microorganismos.

Una suspensión aparece turbia porque las partículas dispersan la luz incidente. Cuantas más células haya, más luz se dispersa y más turbia aparece la solución. La turbidez se puede medir con un fotómetro o espectrofotómetro, aparatos que detectan la luz no dispersada por la muestra.

La diferencia entre un fotómetro y un espectrofotómetro es que el fotómetro emplea un filtro simple (rojo, verde o azul) para generar la luz incidente de una amplitud de onda relativamente ancha, mientras que el espectrofotómetro utiliza un prisma o red para generar luz incidente de una banda estrecha.

Para organismos unicelulares, las unidades fotométricas son proporcionales (dentro de ciertos límites) a la masa celular, y también al número de células. A elevadas concentraciones de células la luz dispersada puede ser captada por otra. Cuando esto ocurre la linealidad entre número de células y turbidez pierde linealidad. Sin embargo, dentro de ciertos límites, las medidas de turbidez son precisas.

El patrón o la escala de McFarland consiste en una serie de tubos herméticamente cerrados, previamente calibrados y con una densidad óptica diferente originada por la aparición de un precipitado de sulfato de bario (SO4Ba. Esta turbidez puede interpretarse ópticamente o por métodos espectrofotométricos y cada una de ellas se corresponde a una concentración conocida de bacterias/ml. Para cada cepa bacteriana hay que establecer la equivalencia entre la turbidez de cada tubo y la masa o la concentración de bacterias (cél/ml) que genera una turbidez similar.

El aseguramiento del estándar de McFarland puede ser verificado por ajuste de una suspensión de una cepa control (por ejemplo, E. coli ATCC 25922) a la misma turbidez, preparando diluciones seriadas 1:10, y realizando el respectivo recuento en placa. La suspensión así ajustada puede tener un conteo de 1,5x108ufc/ml.

OBJETIVOS

  • Preparar estándares para su utilización a nivel de laboratorio.
  • Realizar comparaciones con cultivos inoculados con microorganismos.

MATERIALES

  • Balanza
  • Vasos de Bohemia
  • Varillas de vidrio
  • Probetas
  • Placas de Petri
  • Pipetas graduadas
  • Algodón
  • Microondas
  • Agua destilada
  • Plate Count Agar (PCA)
  • Agua peptonada al 0,1%
  • Cloruro de bario al 1,175%
  • Ácido sulfúrico al 1%
  • Tubos con 5 ml de agua peptonada al 0,1%
  • Frascos con 90 ml de agua peptonada al 0,1%

  • Matriz a analizar: Queso

PROCEDIMIENTO

PARTE I: preparación de los tubos de la escala MacFarland

Proporciones:

Escala de Mc

Farland

Cl2Ba.2H2O

1.175 % p/v

H2SO4

1 %  p/v

Volumen

final

Conc. celular

1

0.1

9.9

10 ml.

3.10(8)

2

0.2

9.8

10 ml.

6.10(8)

3

0.3

9.7

10 ml.

9.10(8)

4

0.4

9.6

10 ml.

12.10(8)

5

0.5

9.5

10 ml.

15.10(8)

6

0.6

9.4

10 ml.

18.10(8)

7

0.7

9.3

10 ml.

21.10(8)

8

0.8

9.2

10 ml.

24.10(8)

9

0.9

9.1

10 ml.

27.10(8)

10

1

9

10 ml.

30.10(8)

...

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