TRABAJO PRÁCTICO N°6. MEDIDAS DE CRECIMIENTO MICROBIANO

TRABAJO PRÁCTICO N°6

MEDIDAS DE CRECIMIENTO MICROBIANO

TURBIDIMETRÍA

ESCALA DE MACFARLAND

MICROBIOLOGÍA GENEREAL  

2017

ROMINA DÍAZ

TECNÓLOGO QUÍMICO  

INTRODUCCIÓN TEÓRICA

Los métodos empleados para contar microorganismos se dividen en dos grandes grupos: métodos de recuento directo o cuantitativos, que permiten contar directamente el número de células, y métodos indirectos o cualitativos, que relacionan algún factor con el número de microorganismos.

Una suspensión aparece turbia porque las partículas dispersan la luz incidente. Cuantas más células haya, más luz se dispersa y más turbia aparece la solución. La turbidez se puede medir con un fotómetro o espectrofotómetro, aparatos que detectan la luz no dispersada por la muestra.

La diferencia entre un fotómetro y un espectrofotómetro es que el fotómetro emplea un filtro simple (rojo, verde o azul) para generar la luz incidente de una amplitud de onda relativamente ancha, mientras que el espectrofotómetro utiliza un prisma o red para generar luz incidente de una banda estrecha.

Para organismos unicelulares, las unidades fotométricas son proporcionales (dentro de ciertos límites) a la masa celular, y también al número de células. A elevadas concentraciones de células la luz dispersada puede ser captada por otra. Cuando esto ocurre la linealidad entre número de células y turbidez pierde linealidad. Sin embargo, dentro de ciertos límites, las medidas de turbidez son precisas.

El patrón o la escala de McFarland consiste en una serie de tubos herméticamente cerrados, previamente calibrados y con una densidad óptica diferente originada por la aparición de un precipitado de sulfato de bario (SO4Ba. Esta turbidez puede interpretarse ópticamente o por métodos espectrofotométricos y cada una de ellas se corresponde a una concentración conocida de bacterias/ml. Para cada cepa bacteriana hay que establecer la equivalencia entre la turbidez de cada tubo y la masa o la concentración de bacterias (cél/ml) que genera una turbidez similar.

El aseguramiento del estándar de McFarland puede ser verificado por ajuste de una suspensión de una cepa control (por ejemplo, E. coli ATCC 25922) a la misma turbidez, preparando diluciones seriadas 1:10, y realizando el respectivo recuento en placa. La suspensión así ajustada puede tener un conteo de 1,5x108ufc/ml.

OBJETIVOS

• Preparar estándares para su utilización a nivel de laboratorio.
• Realizar comparaciones con cultivos inoculados con microorganismos.

MATERIALES

• Balanza
• Vasos de Bohemia
• Varillas de vidrio
• Probetas
• Placas de Petri
• Pipetas graduadas
• Algodón
• Microondas
• Agua destilada
• Plate Count Agar (PCA)
• Agua peptonada al 0,1%
• Cloruro de bario al 1,175%
• Ácido sulfúrico al 1%
• Tubos con 5 ml de agua peptonada al 0,1%
• Frascos con 90 ml de agua peptonada al 0,1%

• Matriz a analizar: Queso

PROCEDIMIENTO

PARTE I: preparación de los tubos de la escala MacFarland

Proporciones:

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