Tinción permanente Ritchie.

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Tinción permanente Ritchie.

Marlon Joel Montelongo Corral, matricula: 133914.Laboratorio de Parasitología, Departamento de Ciencias Química Biológicas, Instituto de Ciencias Biomédicas, Universidad Autónoma de Ciudad Juárez,  Calle Avenida Plutarco Elías Calles 1210, Av. Benjamín Franklin, Col. Fovissste Chamizal, 32310 Juárez, Chihuahua. al133914@alumnos.uacj.mx

Palabras clave: Fijador, tinción, Ziehl Neelsen, AMA, Cryptosporidium

Resumen

Las tinciones se utilizan como reactivos que colorean a las estructuras de los microorganismos, para esto se deben de fijar las estructuras deteniendo su metabolismo y que no tengan cambios morfológicos, los estados de los protozoos, como quistes, trofozoitos, ooquistes, etc. Existen diferentes tipos de fijadores, entre ellos el PVA, MIP, PAF, AF, y más comúnmente Formaldehido, las tinciones se utilizan después de hacer los exámenes coproparasitoscopicos, Faust y Ritchie, como Ziehl, Neelsen, AMA y Wright. Se hicieron tinciones a partir de la mestra de la practica pasada ‘’ coproparasitoscopico por concentración, técnica de Faust y Ritchie, mostrándose Cryptosporidium parvum.

Introducción.

Se recurrieron métodos específicos y complejos para poder determinar que parasito era, debido a su estructura compleja y delicada, se utilizaron métodos de fijación y tinción. El paludismo es un diagnostico en el cual es un ejemplo por el que se utiliza este tipo de métodos o técnicas para poder resaltar las estructuras de Plasmodium, o tripanosomiasis americana mediante un frotis de sangre. (Castillo 2006)

La fijación es utilizado para quistes, ooquistes, trofozoitos, huevos, larvas o hasta adultos)., este penetra a la estructura, detiene su metabolismo, y no permite el cambio de morfología del parasito, algunas soluciones fijadoras, son como el formaldehido, Schaudinn, alcohol polivilinico(PVA), Merthiolate-yodo, formaldehido(MIP), fenol-alcohol-formaldehido (PAF), y alcohol-formaldehido acido acético (AFA), el Formaldehido se utiliza para quistes,  ooquistes, huevos y larvas de helmintos, Shaudinn para preservar quistes, trofozoitos, huevos y larvas, PVA para fijar quistes y trofozoitos, MIF, Fija y tiñe quistes, trofozoito, huevos y larvas, PAF preserva quistes, trofozoitos, huevos y larvas de helmintos, AFA preserva metazoarios. (Becerril ,2014)

Las tinciones para protozoos son permanentes, o temporales, se utiliza para diagnosticar estructuras parasitarias, después de haber realizado métodos coproparasitoscopicos, directo en fresco de concentración/flotación (Faust) o concentración sedimentación (Ritchie). (Genaro 2000).

 La tinción de Ziehl Neelsen modificada, se utiliza para poder observar quistes de protozoos intestinales, estos tienden a ser acido alcohol resistentes (AAR), un ejemplo de ellos es el Cryptosporidium, el cual este protozoo, produce diarrea, en niños y personas inmunodeprimidas, principalmente, Cyclospora e Isospora producen diarrea persistentes, en pacientes con infección de VIH o inmunocomprometidos. Primeramente se toma una porción de la materia fecal pequeña, de preferencia que contenga moco, con una varilla, después se hace una extensión a lo largo del portaobjetos, se deja secar a temperatura ambiente, se fija con metanol, o con mechero pasándolo rápidamente, varias veces, y se deja enfriar, posteriormente se le agrega Fucsina Fenicada cubriéndolo todo, por 5 minutos, este cambiara a color rojo, se lavara después con agua, y se le agrega por último el alcohol-acido por 20 a 30 segundos, para decolorar, los quistes permanecen coloridos rojo-fucsia, se lava con agua, se cubre con azul de metileno por 30 segundos, se vuelve a lavar utilizando agua, y se seca la preparación, se observa a 1000x sin olvidar utilizar aceite de inmersión  en el microscopio, los quistes se observaran rojo-fucsia, y fondo azul.(Portillo, 1997).

Se utiliza la tinción AMA (azul de metileno amortiguado) cuando se cree que existe trofozoitos amebianos, los trofozoitos pueden enroscarse y no tener movimiento, el núcleo y las inclusiones tornaran azul oscuro, y el citoplasma color azul claro, se observan gránulos de cromatina perinucleares, es decir se encontró alguna especie de Entamoeba.(Becerril, 2014)

La tinción policromática o de Wright,  es una solución que consiste en alcohol metílico de eosina (colorante acido) y azul de metileno, el alcohol va a fijar al portaobjetos, el amortiguador rehidrata, va a mantener el pH del colorante y este va a facilitar la absorción del colorante en los componentes del parasito, aunque esta técnica se utiliza principalmente en diferentes tipos de células sanguíneas, comúnmente en frotis de sangre.

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