Practicas De Tincion

Tinción Gram

La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en Bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.

Lo que realizamos en esta práctica fue preparar la muestra que fue colocada en caldo de soya incubada durante 24 hrs. en una laminilla en la cual se hizo el frotis y se fijo con calor directo del mechero y se tiñeron con los siguientes reactivos: cristal violeta (colorante primario), yodo gran (lugol diluido), acetona-alcohol (solución decolorante) y safranina (colorante de contraste).

La preparación del extendido se realizo colocando en una laminilla limpia, seca y desgrasada una gota de la solución salina utilizando el asa de platino previamente esterilizada en mechero al punto en que esta estuviera color rojo vivo. Después tomamos una pequeña porción de la muestra asépticamente con el asa y la mezclamos con la solución salina para obtener una suspensión.

Posteriormente esta la extendimos a lo largo de la laminilla y se fijo con calor, esto se logra pasando la lámina varias veces por la llama del mechero (máximo 3 veces). La lámina no debe calentarse mucho y ello se verifica tocando suavemente el dorso de la mano con lámina.

Para la tinción se colocaron las las láminas extendidas y fijadas en una bandeja adecuada y cubrir su superficie con cristal violeta por un minuto aproximadamente, después se lavo con agua directa de la llave y se escurre.

A continuación se coloco el lugol (yodo Gram) durante 30 segundos aprox. igualmente se lavo con agua de la llave, para el decolorante (acetona-alcohol) se deja actuar de 10 a 15 seg. Se lava y se deja escurrir. Por último para la tinción Gram, se añade la safranina (colorante de contraste) durante 30 seg. se lava y escurrimos.

Posteriormente se observo en el microscopio primeramente encontrando las células en 10X y al encontrarlas colocar una gota de aceite de inmersión sobre las láminas teñidas y secas y examinarlas bajo el microscopio de luz, enfocando ahora a 100X. Se observaron varios campos hasta encontrar aquél, donde las células están adecuadamente separadas, para permitir la visualización de la morfología, arreglo de las células y su reacción al Gram.

Diferencia entre Gram + y Gram –

Las bacterias Gram negativas son constantes en su reacción, los microorganismos Gram positivos pueden presentar respuestas variables en ciertas condiciones (son gramlábiles). Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias Gram positivas pierden la propiedad de retener el cristal violeta, y en consecuencia, se tiñen por la safranina apareciendo como Gram negativas.

Aquí se puede apreciar las diferencias estructurales y químicas de los dos tipos de pared bacteriana:

Pasos de la tinción Gram

1. Tinción con cristal violeta y tratamiento con iodina (lugol)

2. Decoloración con acetona-alcohol

3. Contraste con safranina

Las bacterias Gram + se ven de color purpura- violeta y las Gram – de color rojizo-rosado

Resultados:

En

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