Trabajo Funcional

Introducción

Uno de estos factores reguladores de la expresión es la epigenética, la cual tiene relativamente poco tiempo de estudio, y la cual es de gran importancia debido a su relación en las modificaciones pos-traduccionales, que afectan la expresión de genes y transcritos en los organismos vivos, principalmente en las células eucariotas. Debido a que ciertos factores en el medio en el que se desarrollan los organismos en este caso las personas pueden generar ciertas modificaciones pos-traduccionales (regulación epigenética) que producen algunos de los trastornos o conductas ya antes mencionados. Algunas metilaciones en ciertas citosinas los promotores de la dopamina y de factores relacionados a receptores de dopamina pueden ser potencialmente heredadas por lo cual se propone el estudio de esta proteína para tener un mejor conocimiento en cuanto a estas regulaciones y a verificarlas en los genes de esta proteína. (Van Tol.2012)

El diseño cuidadoso de primers es uno de los aspectos más importantes de la PCR. Primers mal diseñados, pueden amplificar otros fragmentos de DNA distintos a los blancos. Es por eso que el diseño de primers requiere una serie de parámetros estrictos, para que se logre una hibridación exitosa. Esta tecnología es importante en la investigación clínica en estudios de genes asociados a enfermedades(Kadonaga.2010)

Los factores de transcripción son proteínas que se unen al DNA e interactúan con las RNA polimerasas para regular la expresión del gen. Algunos TF's contienen un dominio de unión a DNA y pueden unirse directamente a las secuencias cortas de DNA especificas (motivos); otros se unen al DNA indirectamente a través de interacciones con TF's que contienen un dominio de unión a DNA. La región de unión al DNA permite que el factor se fije específicamente a unos motivos o secuencias breves de DNA gracias a distintos mecanismos moleculares (homeodominio, dedos de zinc). La región reguladora permite que la proteína aumente la transcripción (dominio de activación) o la disminuya (dominio de represión.

Los factores de transcripción son fosforilizados por cinasas específicas, y esa fosforilación puede modificar la localización subcelular del factor de transcripción o su afinidad por el DNA, lo que, a su vez, altera la expresión de los genes. Entre los factores de transcripción que regulan la proliferación celular se encuentran varios protooncogenes, cuyas mutaciones pueden estar asociadas a tumores (c-myc), y varias clases de genes de supresión tumoral, como el p53 y el gen del retinoblastoma, los cuáles están presente en este trabajo. Los factores de transcripción también intervienen en la regulación del propio ciclo celular. . (Wei, C. L.,2006)

Una de las funciones importantes que ocupa este gen es que el receptor de dopamina responsable de la señalización neuronal en el sistema mesolímbico del cerebro, un área del cerebro que regula la emoción y el comportamiento complejo.

Este gen se encuentra sumamente conservada entre especies, ya que, la proteína dopamina que codifica es reguladora del sistema periférico, este gen actúa como una respuesta de alguna señalización. .( Lichter, J,2014)

7.2

El gen DRD4 es un marcador genético y un modelo útil para estudios de asociación

epigenéticos y farmacogenómicos que buscan identificar el origen de trastornos psiquiátricos y comportamientos (Paredes,2013)

7.3

La proteína DRD4 de Homo sapiens, presenta un 100% de ID con Mus musculus,

por esta razón se utilizará como organismo modelo. (Susanne Gilsbach. 2012).

7.4

In silico

→ Obtener secuencia nucleótidica del gen

              → Traducir la secuencia nucleótidica a aminoácidica usando el programa Bio-Edit

              → Usar programas de comparación de secuencias para encontrar sus homológos.

              → Usar programas de anotación Ab initio

In vitro

              → Extraer gen y purificarlo

              → Insertar gen en cultivo celular

              → Esperar a que el cultivo exprese el gen de interés

              → Se procede a realizar lo mismo, pero en otros cultivos celulares

→ Deletar o silenciar el gen para verificar sus efectos, si son encontrados anteriormente.

7.6

Transferencia génica en Mus musculus

• Trabajar con el fenotipo de ratón DRD4 KO.

• Estimular a una hembra para que ovule.
• Cruzar la hembra con un macho del mismo fenotipo.
• Extraer óvulos fecundados.
• Transformar óvulos mediante microinyección poronuclear.
• Insertar blastocitos transformados en la misma hembra.
• Verificar si son transgénicos mediante técnicas de expresión génica.

7.5

Tabla 1. Organismos, número de acceso y %ID de la proteína homóloga DRD4.

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