Técnica Histológica OBSERVACIÓN

Técnica Histológica

                                                         OBSERVACIÓN [pic 1][pic 2]

INMEDIATA                                                                                           MEDIATA            [pic 3][pic 4]

S/COLORANTE                 C/COLORANTE [pic 5]

                                            (VITAL)                                                                                    FIJADOR

-MICROSC.                       -INTRAVITAL       [pic 6][pic 7]

 CONTRASTE                    -SUPRAVITAL

 DE FASE

-MICRO. DE                      EJ: AZUL TRIPANO                                                                  HYE INTERFERENCIA              AZUL PIRROL/CARMÍN/  

                                          VERDE JANO/ROJO NEUTRO CULTIVO                           AZUL DE METILENO/ABC [pic 8]

PASOS

1)    Obtención de la muestra: tejido vivo: biopsia tejido post mortem: necropsia.

2)    Fijación: objetivos: detener la autolisis /impedir microorganismos/ mantener la

estructura tal cual están en el organismo.  

TIPOS

FISICOS: CALOR/FRÍO /DESECACIÓ0N [pic 9]

QUÍMICOS                       SIMPLES                           FORMOL AL 10% [pic 10][pic 11]

                                                                                                                GLUTARALDEHIDO (ME)

                                                                                    TETRÓXIDO DE OSMIO (ME)

                                                                                    ALCOHOL METÍLICO/ETÍLICO

                                          COMPUESTAS                               LÍQUIDO [pic 12]

3)    INCLUSIÓN EN PARAFINA: objetivo: endurecer el preparado para llevar a cabo el corte del mismo. Pasos: deshidratación: con alcohol dividido en varias soluciones con diferentes concentraciones ascendentes. /aclarante: xilol. Se utiliza como intermediario entre el alcohol y la parafina. Inclusión: se introduce el tejido y parafina en molde de metal.

4)    Corte y montaje primario: en micrótomo. Se coloca en portaobjetos.

5)    Tinción: uso xilol y después alcohol (tengo que sacar la parafina) rehidratación en

concentraciones decrecientes de alcohol.

HEMATOXILINA: no es un colorante real, se usa mordiente para que tome el tejido. Basolfilia: afinidad por el colorante básico.

HEMATOXILINA              BIOMOLECULA                ESTRUCTURA CELULAR

                                          ADN/ARN                         NÚCLEO SE TIÑE VIOLETA/AZUL

                                                                                    RIBOSOMAS/RER              SINTESIS PROTEICA [pic 13][pic 14][pic 15]

                                                                                    CITOPLASMA BASÓFILO.

NÚCLEO             CROMARINA DENSA      BASOFILIA INTENSA       SINT. LIPIDOS/HDC          [pic 16][pic 17]

                            CROMATINA LAXA          BASOFILIA PÁLIDA          SINT PROTEICA [pic 18][pic 19][pic 20]

COLORANTE ÁCIDO – SE UNE A ESTRUCTURAS POSITIVAS. ES LA EOSINA.  EOSINOFILIA/ACIDOFILIA: AFINIDAD POR EL COLORANTRE ÁCIDO.

EOSINA               PROTEÍNAS                      MITOCONDRIA   ALTA TASA METAB. ACIDOFILA DENSA [pic 21][pic 22]

                                                                      CITOESQUELETO

                                                                      CITOPLASMA ACIDOFILO.

DESPUES DE LA TINCION, SE DESHIDRATA DE NUEVO CON TINCIONES CRECIENTES DE ALCOHOL. SE COLOCA EL CUBREOBJETOS.

ESTRUCTURAS QUE NO SE CONSERVAN BIEN: LÍPIDOS E HDC SON DEGRADADOS POR EL ALCOHOL Y EL XILOL. EL FORMOL NO ALTERA LOS LÍPIDOS!

OJO CON: ARTIFICIOS DE TÉCNICA! MANCHAS/ SUPERPOSICIÓN

METACROMASIA: SE VE ROJO EN TEJIDOS QUE TIENEN MUCHAS CARGAS NEGATIVAS JUNTAS (TEJIDOS POLIANIONICOS). RER DEL PLASMOCITO/ MEC DEL CARTÍLAGO/ GR. DEL MASTOCITO. SUCEDE CON COLORANTES: AZUL DE TOLUDINA/METILENO/TREONINA (SUCEDE PORQUE TIENEN ANILINA)

OTRAS TINCIONES: MÉTODO DEL ÁCIDO PERYÓDICO DE SCHIFF (PAS) TÉCNICA PARA HIDRATOS DE CARBONO

ÁCIDO P. OXIDA LOS GRUPOS OH Y LOS TRANSFORMA. REACTIVO DE SCHIFF-

MEMBRANA BASAL, GLUCOGENO, MUCINA Y GLUCOCALIZ SON PAS +.

MÉTODO DE FEULGEN: TÉCNICA PARA ADN: SOLO ADN! NO ARN NI NUCLEOLO. ÁC. CLORHÍDRICO: ROMPE ENLACES N-GLUCOSIDICOS ENTRE LA BASE

.REACTIVO DE SCHIFF

TÉCNICA PARA LÍPIDOS: FIJACIÓN: POR CONGELACIÓN CORTE: CRIOSTATO

TINCIONES: SUDAN III/ SUDAN IV O ROJO ESCARLATA/SUDAN BLACK/ ACEITE ROJO/TETRÓXIDO DE ÓSMIO.

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